高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經濟、環保。

產品概述

伏馬毒素檢測試劑盒酶聯免疫反應測試盒基于競爭性酶聯反應原理，含有伏馬毒素檢測試劑盒(SEM)的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結合。加入底物后，產物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有伏馬毒素檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【伏馬毒素檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3h，培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現乳化現象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

稀釋倍數：2.0

3）雞蛋【伏馬毒素檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養3小時，在培養期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

6）血清【伏馬毒素檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應;

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數)。

10．結果計算【伏馬毒素檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數)

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數)

例如，肉類樣品的稀釋倍數是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

9236347  250mA Fuse sensor distribution Board              CNY                             

9236331  U-Block              CNY                             

9236142  Disposal Chute, straight, BR Rapid Plate                   CNY                             

9230755  Rechen Stirrer Rose 80             CNY                             

9235701  Cable 5V, RCS1                   CNY                             

9230433  Tubing Block              CNY                             

9235298  Plunger tip, syringe 500µl                  CNY                             

9235282  Grease, long term             CNY                             

9022809  Detect Barrel, QXA           CNY                             

9239554  ZLV EX Digital PCBA (1.5.7 Firmware)               CNY                             

9239553  Digital PCBA (1.5.7 Firmware)                   CNY                             

9238657  Main cable, centrifuge              CNY                             

9238630  Jumper, 2-channel             CNY                              【伏馬毒素檢測試劑盒】

9238620  Computer board Zent3, no Eprom            CNY                             

9242063  Evaporation trap, IQ/OQ, QS           CNY                             

9241890  QIArent&go - Rent out fee EZ1 XL            CNY                             

9241825  Pyro Q96 MDa, Full Agreement       The Full Agreement, PyM provides full service coverage for the PyroMark instrument. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one on-site inspection service, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a response time of 2 working days.         CNY                             

9241167  Board, LED scan, QX                  CNY                             

9241148  Transport lock, Y axis, M48               CNY                             

9241143  Application AUTOPURE (customized)                CNY                             

9241005  QIArent&go - Rent out fee BR Universal                   CNY                             

9240987  Kit, electronic, FFC-plugs, Qsym                CNY                             

9240980  Sensor, tray, sample tracking, Qsym                  CNY                             

9240945  Sensor, xy, portal, Qsym            CNY                             

9234856  Tubing coupling piece for washer liquid            CNY                             

9234852  Card, ISDN, Fritz PCI                  CNY                             

9240783  Update, Weigh Cell, AP96                  CNY                             

9240774  Assy, Transfer Rack, AP96                  CNY                             

9241632  LED Light System, AP                 CNY                              【伏馬毒素檢測試劑盒】

9241369  Temperature Controller, EZ1a                   CNY                             

9243645  Guided Valid Support, QIA Extraction Sys         The QIAGEN Other Extraction System Guided Validation Support service includes all travel ａnd labor charges for a site visit up to 2 days by a QIAGEN Specialist.  A QIAGEN specialist will provide an introduction to QIAGEN extraction chemistry utilized in the process, review the appropriate Handbook ａnd User Manual, as well as hands-on chemistry ａnd instrument operation as required.  The Guided Validation service includes experimental design consultation, internal validation documentation support, ａnd QIAGEN sponsored data templates.  The QIAGEN Specialist will also aide the customer in running some samples to initiate the validation process.  Enough consumable chemistry ａnd accessories (QIAGEN or other vendors) should be purchased by the customer to cover the validation experimental design ａnd are not included in the cost of validation support. Please indicate which protocols to validate (Biosprint 96, DNA mericon)         CNY                             

9243542  BR MDx, PM Service        "Service response time (repair): not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes

Inspection/maintenance delivery: onsite

Cost coverage for Repair Parts : not included

Cost coverage for labor: yes, full coverage

Cost coverage for travel: yes, full coverage

Replacement system (Loaner) provision: not applicable

Transportation cost coverage: yes, full coverage"  CNY                             

9243305  Power Cord, India             CNY                             

QY-x2383 人膀胱移行細胞癌細胞T-24                                                       

QY-x2384 人結腸癌細胞SW620                                                  

QY-x2385 人甲狀腺鱗癌細胞SW579                                                  

QY-x2386 人結腸癌細胞SW[SW-]                                                 【伏馬毒素檢測試劑盒】

QY-x2387 豬睪丸細胞系ST                                                  

QY-x2388 小鼠骨髓瘤細胞SP2/0                                                 

QY-x2389 人肝癌細胞SMMC-7721                                                      

QY-x2390 人卵巢癌細胞SK-OV-3                                                 

QY-x2391 人肝癌細胞SK-HEP-1                                                   

QY-x2392 人乳腺腺癌細胞SK-BR-3                                                     

QY-x2393 人子宮頸鱗癌細胞SiHa                                                       

QY-x2394 人膠質瘤細胞SHG-44                                                 

QY-x2395 人胃癌SGC7901                                                   

QY-x2396 人成骨肉瘤細胞Saos-2                                               

QY-x2397 大鼠雪旺細胞RSC96                                                    

QY-x2398 小鼠前列腺癌細胞RM-1                                                     

QY-x2399 人結腸腺癌細胞RKO                                                   

QY-x2400 猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞RF/6A                                                     

QY-x2401 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞RAW264.7                                                

QY-x2402 人Burkitt＇s淋巴瘤細胞Raji                                                 【伏馬毒素檢測試劑盒】

QY-x2403 人肝細胞QSG-7701                                                      

QY-x2404 豬腎細胞系PK-15                                                

QY-x2405 豬髖動脈內皮細胞PIEC                                                       

QY-x2406 前列腺癌細胞系PC-3                                                  

QY-x2407 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12                                              

QY-x2408 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)PC-12                                              

QY-x2409 人胰腺癌細胞PANC-1                                                  

QY-x2410 逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞PA317                                                      

QY-x2411 小鼠骨髓瘤細胞P3/NSI/1-Ag-4【NS-1】                                                    

QY-x2412 鼠成纖維細胞系 NIH/3T3 詢價 ATCC                                                    

QY-x2413 大鼠腎細胞 NRK 詢價 ATCC                                                     

QY-x2414 人胃癌細胞 NCI-N87 [N87] 詢價 ATCC                                                    

QY-x2415 人Burkitt＇s淋巴瘤細胞 NAMALWA 詢價 ATCC