【卵巢成纖維細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【卵巢成纖維細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【卵巢成纖維細胞】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

細胞培養代理品牌

【卵巢成纖維細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015186  Tip Guard, M96            CNY                                  

9015094  Vacuum Manifold Top, SBS          CNY                            【卵巢成纖維細胞】   

9015021  Tubing, retractable tubing, DISU, BR8 RD          CNY                                  

1031586  Buffer TCL, 2x (8,5/15),G           CNY                                  

1027986  Buffer MRL (90/125),KG             CNY                                  

62724     EZ1 DSP Virus Kit (48)  CE-IVD Certified Kit for Extraction of DNA ａnd RNA Viruses from Plasma ａnd Serum. To be used in combination with EZ1 DSP Instrument (SAP 9001360) ａnd EZ1 DSP Virus Card (SAP 9017707). Available Input Volumes 100/200/400 µl, selectable elution volumes 60/90/120/150 µl. Processing time for 6 samples 45 Minutes.      CNY                                  

9243521  QIAlink, Maintenance / Support Agreement  Support for QIAlink interface with LIMS system. Includes yearly licensing fees, maintenance cost ａnd software updates. Labor ａnd travel included.   CNY                                  

9014405  Connecting plate, BR3000-RapidPlate          CNY                                  

9014313  BGR Bottle Holder Rotor              CNY                                  

9018152  Cable, eluate drawer, Qsym          CNY                                  

9018151  Eluate drawer, Qsym            CNY                                  

9018141  Heated shaker, Qsym            CNY                                  

9018138  PCB, control, et/hs, Qsym            CNY                                  

9018127  Motor, x, extractor, Qsym            CNY                                  

9018088  Cooling adapter, tubes, 2 ml, Qsym             CNY                                  

9018085  Cooling adapter, MTP, RB, Qsym         CNY                                  

9018081  Software Package QIAplex MDD         CNY                                  

9017853  CD, User Manual QIAcube           CNY                            【卵巢成纖維細胞】   

9017699  EX.UNIT, RCS Incubator Tower (65°)        CNY                                  

9015148  Z-Module 300 µl, BR8 RD            CNY                                  

9015072  EX.UNIT, Syringe Pump Plato 3000 (7135)        CNY                                  

9015064  Shakerplate, autom., BR8 RD              CNY                                  

9019731  Board, A/D, V2, QX             CNY                                  

9001550  Rotor-Gene Q 2plex Platform              CNY                                  

9013723  Motor-X, RCS1            CNY                                  

9013676  Drive Unit MP Holder LH, Shaker BR8000          CNY                                  

9013675  Shakerplate, autom., BR8000        CNY                                  

9013435  Maintenance Kit BR 9600 (B)        CNY                                  

9013427  Maintenance kit, semi annual, BR9600 (A)          CNY                                  

9019655  Quick lock plug, PyroVW            CNY                                  

9019621  Tip ejector holder (incl. magnet), Cx2          CNY                                  

9019605  Pipettor, spring guard ring (black), Cx2              CNY                                  

9019575  Opto switch, X-axis, Cxx             CNY                                  

QC024    包涵體溶解液       50ml                                  

QC025    蛋白復性液    100ml                                

QC026    蛋白標準(5mg/ml BSA) 1ml                              【卵巢成纖維細胞】

QC027    PMSF(100mM)      1ml                             

QC028    5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液  250ml                                

QC029    SDS-PAGE電泳液(10X)      100ml                                

QC030    SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 2ml                             

QC031    非變性PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)    2ml                             

QC032    10%過硫酸銨 1.5ml                                 

QC033    30% 丙烯酰胺 (29:1)   100ml                                

QC034    40% 丙烯酰胺 (39:1)   100ml                                

QC035    0.5M DTT      2ml                             

QC036    10% SDS       50ml                                  

QC037    TEMED  5ml                             

QC038    1M Tris-HCl,pH6.8 50ml                                  

QC039    1.5M Tris-HCl,pH8.8     100ml                                

QC040    Western轉膜緩沖液 （20x）     100ml                                

QC041    Western一/二抗稀釋液 100ml                                

QC042    Western封閉液(BSA型）    100ml                                 【卵巢成纖維細胞】

QC043    Western洗滌液     250ml                                

QC044    Western一抗二抗去除液     250ml                                

QC045    BCIP工作液 50mg/ml  100ul                                 

QC046    NBT工作液 50mg/ml   100ul                                 

QC048    10% Sodium Azide (疊氮鈉) 100ml                                

QC049    Protease Inhibitor  A(廣譜性)     1ml                             

QC050    Protease Inhibitor  B(適用于細菌)      1ml                             

QC051    Protease Inhibitor  C(適用于哺乳動物)     1ml                             

QC052    Protease Inhibitor  D(適用于真菌)     1ml                             

QC053    Protease Inhibitor  E(適用于哺乳動物)      1ml                             

QC054    Phosphatase Inhibitor M(廣譜性)  1ml                             

QC055    胰酶細胞消化液    100ml