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【子宮成纖維細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：
1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。
3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。
5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。
6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。
【子宮成纖維細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！
一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書
二、客戶自備試劑
1、PBS
2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
3、0.25% （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）
三、細胞背景
1、生長方式：貼壁
2、種屬：Homo sapiens 人
四、培養條件
1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
2、溫度：37.0°C
3、氣體:空氣 95%，CO2 5%
【子宮成纖維細胞】五、培養方法
收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：
1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。
2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml 含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。
3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養
4，傳代比例：1:2-1:3
七、常見問題及解決方案
1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。
細胞培養代理品牌
| | BD 產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學和蛋白質組學等諸多領域，旗下擁有Clontech 、Discovery labware 、Pharmingen 、Falcon 等質品牌，值得稱贊的是每一個品牌在其所在的領域都是其中的佼佼者。 |
細胞培養代理品牌
| | GIBCO 作為細胞培養的金字招牌，是在此領域的領導者，現在是Invitrogen的一部分。Gibco可以提供*為廣泛的品種以滿足用戶不同的需求，每一種產品都通過*為嚴格的品質管理。同時，Gibco也可按客戶的要求對培養基的配方進行改動，或完全按客戶的配方進行生產。 |
【子宮成纖維細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com
9015382 Cover, heat/cool unit, M96 CNY
9018396 BioCalculator, Software CD, QIAxcel CNY
9012274 Power supply (6A), color code 9170 CNY
37900 Qproteome Bacterial Protein Prep Kit CNY 【子宮成纖維細胞】
9015337 Regulator, DC5V CNY
9015323 O-rings, plunger fixing, M48 (6) CNY
133035 NeXtalStock Ammonium phosphate (200) CNY
133033 NeXtalStock Cobalt(II) Chloride (200) CNY
9001637 Rotor-Gene Q 2plex HRM (w/o PC) System Rotor-Gene Q 2plex HRM (w/o PC) System includes the Rotor-Gene instrument ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document. CNY
239045 GelPilot 100 bp Plus Ladder (100) Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 11 fragments: 100 – 1500 bp CNY
9015311 Unit, spotlight, left, M48 CNY
133147 NeXtalStock Ammonium sulfate (200) CNY
133145 NeXtalStock ADA pH 6.0 (200) CNY
133018 NeXtalStock Ammonium nitrate (200) CNY
1034963 Buffer PKD (15/15),KG CNY
950140 Binding Additive (DX) (4.0 g) CNY
9018318 Fuses 4A, centrifuge board (220V), QIAC CNY
9015378 D-module, M96 CNY
9015369 Filter, HEPA, before S/N 8, M96 CNY
133158 NeXtalStock CAPS pH 10.0 (200) CNY 【子宮成纖維細胞】
133156 NeXtalStock BIS-TRIS Propane pH8.5 (100) CNY
133151 NeXtalStock BIS-TRIS pH 6.5 (100) CNY
133074 NeXtalStock PEG 1,000 (200) CNY
133071 NeXtalStock Nickel(II) chloride (200) CNY
870111 therascreen EGFR RGQ PCR Kit CE (24) CNY
805923 REPLI-g Service, Single Tube (100 µg) CNY
9015356 Interlock switch 2, for maintenance CNY
9015345 Board, PSB CNY
133042 NeXtalStock DL-Malic Acid (200) CNY
133037 NeXtalStock Dimethyl sulfoxide (200) CNY
9018394 Key, User, red, QIAxcel FA CNY
9018337 Tubing, Valve to injection needle (set) CNY
9001669 Rotor-Gene Q 6plex (w/o PC) PrioPLUS "Rotor-Gene Instrument
Installation of Rotor-Gene & Introductory training
Warranty extension to 3 yrs
Loaner available in 2 days*
Annual Inspections (1 onsite PM per yearr)
Priority service provision over non-contract customers
Documented installation & PM report
Unlimited number of repair service
All cost covered (travel, labor, parts)" CNY
QT101-6 TUREscript One Step RT-PCR Kit（一步法反轉錄試劑盒） 2050 【子宮成纖維細胞】
QT101-8 TUREscript SY Green qRT-PCR Kit （兩步法熒光定量反轉錄試劑盒） 2050
QD101-1 DNA MarkerⅠ（條帶100.200.300.400.500.600） "50T
"
QD101-3 DNA Marker Ⅱ（條帶100.300.500.700.900.1200） "50T
"
QD101-5 DNA Marker Ⅲ（條帶300.500.800.1500.2000.3000.5000） "50T
"
QD101-7 DNA Marker Ⅳ（條帶500.1000.1500.3000.5000.8000） "50T
"
QD101-9 DNA Marker Ⅴ（條帶200.400.700.1000.1500.2000） "50T
"
QD101-11 DNA MarkerⅥ(條帶250.1000.2500.5000.7000.10000) "50T
"
QD101-13 DNA Marker Ⅶ（條帶300.500.1000.1500.2000.2500） "50T
"
QD101-17 50bp DNA Marker（條帶50.100.150.200.250.300.250.400） "50T
"
QD101-19 50bp Plus（條帶50.100.150.200.250.300.350.400.500.600.1000） "50T
"
QD101-21 100bp DNA Marker（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500） "50T
"
QD101-23 100bp Plus（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500.2000.3000.5000） "50T
"
QD101-25 200bp DNA Ladder "50T
"
QD101-27 250bp DNA Ladder（條帶250.500.750.1000.1500.2000.2500.3000.5000） "50T
"
QD101-29 300bp DNA Ladder（條帶300.600.900.1200.1500.1800.2500.3000.5000） "50T
"
QD101-31 500bp DNA Ladder（500.1000.1500.2000.2500.3000.3500.5000） "50T
" 【子宮成纖維細胞】
QD101-33 1kb DNA Marker（條帶1000.2000.3000.4000.5000.6000.8000.10000） "50T
"
QD101-35 1kb Plus（條帶300.500.800.1000.1500.2000.3000.4000.5000.6000.8000.10000） "50T
"
QD101-43 DL2000（條帶100.250.500.750.1000.2000） "50T
"
QD101-45 DL2000 Plus （條帶100.250.500.750.1000.2000.3000.5000） "50T
"
QH406-1 λDNA/HindⅢ "50T
"
QH406-3 pUC19 DNA/MspⅠ "50T
"
QC101-01 DH5α感受態細胞 40×100ul
QC102-01 Top10感受態細胞 40×100ul
QC103-01 JM109感受態細胞 20×100ul
QC104-01 BL21(DE3)感受態細胞 20×100μl
QC105-01 BL21(DE3) Competent cell 20×100ul
QC121-01 高效感受態細胞制備試劑盒 100×100μl
QC201-1 pSURE -T 載體連接試劑盒 20次
QC201-3 pSURE-T Simple載體連接試劑盒 20次(帶T4 ligase）
