【胎盤絨毛膜細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【胎盤絨毛膜細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【胎盤絨毛膜細胞】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【胎盤絨毛膜細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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130905    NeXtal DWBlock AmSO4 Suite            CNY                                  

130821    NeXtal CubicPhase 1w Mo/C 8% µplate (2)        CNY                                  

4523003  artus Infl./H1 LC/RG RT-PCR Kit (24) RUO              CNY                                  

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4555163  artus M.tuberculosis TM PCR Kit (24) CE          CNY                                  

130805    NeXtal CubicPhase 1w Mo µplate (100)             CNY                            【胎盤絨毛膜細胞】   

4518263  artus HCV RG RT-PCR Kit (24) CE             CNY                                  

4514303  artus BK Virus QS-RGQ Kit (24) RUO         CNY                                  

4510035  artus Enterovirus LC RT-PCR Kit (96) PRE         CNY                                  

4513366  artus HI Virus-1 QS-RGQ Kit (72) CE         CNY                                  

129073    MaXtract High Density (25 x 50 ml)            CNY                                  

4505003  artus HAV LC RT-PCR Kit (24) RUO           CNY                                  

4506303  artus HBV QS-RGQ Kit (24) RUO        CNY                                  

80224     AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit (50)             CNY                                  

79306     QIAzol Lysis Reagent (200 ml)            CNY                                  

74903     RNeasy Plant Mini Kit (20)    20 RNeasy Mini Spin Columns, 20 QIAshredder Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                                  

74804     RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (50) 50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), QIAzol Lysis Reagent, RNase-free Reagents ａnd Buffers  CNY                                  

27704     QIAprep Spin M13 Kit (50)   For 50 ssDNA preps: 50 QIAprep Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)   CNY                                  

27361     DirectPrep 96 Miniprep Kit (4)      For 4 x 96 plasmid minipreps: 4 DirectPrep 96 Plates, Reagents, Buffers, Flat-Bottom Blocks ａnd Lids, AirPore Tape Sheets, Tape Pads, Elution Microtubes RS, Caps       CNY                                  

19591     Caps for Elution Microtubes (50x8)             CNY                                  

19589     5-hole tube units (256)          CNY                                  

72022     Oligotex Direct mRNA Mini Kit     For 12 mRNA minipreps: 420 ul Oligotex Suspension, Small Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                            【胎盤絨毛膜細胞】   

69985     Grinding Jar Set, S.Steel (2 x 10ml)            CNY                                  

19576     Round-Well Blocks (24) 96-well blocks with 1.2 ml wells, 24 per case. Used for lysis steps in the QIAamp 96 DNA Blood. Required for MagAttract 96 Miniprep Core Kit (PG 2003)   CNY                                  

19092     Pathogen Lysis Tubes L (50), KG         CNY                                  

12165     QIAGEN Plasmid Maxi Kit (100)  100 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers      CNY                                  

10063     QIAGEN-tip 500 (25)    25 columns; 500 µg column capacity   CNY                                  

133285    NeXtalStock TRIS pH 9.0 (200)          CNY                                  

133279    NeXtalStock Succinic acid pH 7.0 (200)             CNY                                  

4504063  Artus Parvo B19 LC PCR Kit (24) CE          CNY                                  

4503003  artus CMV LC PCR Kit (24) RUO        CNY                                  

990399    Spin Column Adapter Rings (25)          CNY                                  

QY112-1 高純度酵母質粒大提試劑盒       10T                            

QY113-1 革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒    "100T

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QY114-1 高純度革蘭氏陽性菌質粒小量提取試劑盒       "100T

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QY115-1 革蘭氏陽性菌質粒中量提取試劑盒    "100T

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QY116-1 高純度革蘭氏陽性菌質粒中量提取試劑盒       "100T

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QY117-1 革蘭氏陽性菌質粒大量提取試劑盒    10T                            

QY118-1 高純度革蘭氏陽性菌質粒大量提取試劑盒       10T                            

QY119-1 96普通質粒小提試劑盒      "2板

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QY120-1 96酵母革蘭氏陽性菌質粒小提試劑盒      "2板

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QY201-1 小量DNA產物純化試劑盒  "100T

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QY202-1 小量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒     "100T

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QY203-1 大量DNA產物純化試劑盒  "100T

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QY204-1 多功能DNA純化回收試劑盒     "100T

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QY205-1 小分子量DNA，片段純化回收試劑盒      "100T

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QY206-1 玻璃奶DNA產物純化回收劑盒  "100T

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QY301-1 細菌基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY302-1 酵母基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY303-1 革蘭氏陽性細菌基因組DNA提取試劑盒  "100T

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QY304-1 血液基因組DNA小量提取試劑盒(離心柱型)   "100T

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QY306-1 血液基因組DNA大量提取試劑盒(離心柱型)   "100T

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QY308-1 細胞基因組提取試劑盒       "100T

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QY309-1 植物基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY310-1 快捷植物基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY311-1 血液細胞組織基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY312-1 微量樣品基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY313-1 血液基因組DNA非離心柱型（0.1~20ml）      "100ML

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QY314-1 血凝塊基因組DNA提取試劑盒  "100T

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QY315-1 血漿游離基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY316-1 M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒  "100T

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"                   【胎盤滋養層細胞】

QY110-1 高純度酵母質粒中量提取試劑盒    "100T

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QY111-1 酵母質粒大量提取試劑盒  10T