【卵巢癌組織源性原代細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【卵巢癌組織源性原代細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【卵巢癌組織源性原代細胞】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

細胞培養代理品牌

【卵巢癌組織源性原代細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015354  Springs, gas (2)            CNY                                  

133054    NeXtalStock Imidazole HCl (200)         CNY                                  

9001671  PyroMark Q24 Instrument    For methylation ａnd mutation analysis using Pyrosequencing technology in 24 well  CNY                                  

950901    Capture Plate, standard yield (5)           CNY                                  

37430     PhosphoSerine Antibody Q5  100 ug mixture of anti-phosphoserine antibodies(isotypes mouse IgG1 ａnd IgM, for 200 ml working solution)   CNY                                  

133030    NeXtalStock Cesium sulfate (200)        CNY                                  

9001627  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System Priority includes the Rotor-Gene system ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.     CNY                                  

9001620  Rotor-Gene Q 2plex System         CNY                                  

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For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using probe detection with multiple assays." CNY                                  

204352    QuantiFast Probe PCR+ROX Vial Kit (80)           CNY                                  

9015361  Slide table              CNY                                  

133050    NeXtalStock HEPES sod. salt pH 7.5 (200)         CNY                                  

9018391  Key, Data Review, green, QIAxcel        CNY                                  

9018387  Lamp, UV, EZ1a            CNY                                  

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239035    GelPilot 100 bp Ladder (100) Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 6 fragments: 100- 600 bp    CNY                                  

9015304  Sensor, reagent tub stopper, M48         CNY                                  

133144    NeXtalStock 8 M Ammonium acetate (200)         CNY                                  

QYD585  禽流感ELISA試劑盒（AI-Ab)    96孔/盒                             

QYD586  禽腦脊髓炎ELISA試劑盒（AE-Ab)   96孔/盒                             

QYD587  傳染性喉氣管炎ELISA試劑盒（ILT-Ab)  96孔/盒                             

QYD588  鴨腸炎沙門氏菌ELISA試劑盒（SE-Ab)   96孔/盒                             

QYD589  鴨鼠傷寒沙門氏菌ELISA試劑盒 （ST-Ab）   96孔/盒                             

QYD590  雞傳染性貧血ELISA試劑盒（CAV-Ab)     96孔/盒                             

QYD591  偽狂犬 -抗體檢測ELISA    96孔/盒                             

QYD592  豬瘟 - 抗體檢測ELISA      96孔/盒                              【卵巢癌組織源性原代細胞】

QYD593  豬瘟 - 抗原檢測 ELISA     96孔/盒                             

QYD594  口蹄疫-NS(3ABC) - 抗體檢測ELISA 96孔/盒                             

QYD595  口蹄疫-NS(3ABC)- 抗體檢測ELISA  96孔/盒                             

QYD596  口蹄疫 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD597  藍耳病 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD598  圓環病毒 IgG - 抗體檢測ELISA       96孔/盒                             

QYD599  豬水泡病毒 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD600  豬細小病毒 - 抗體檢測ELISA: Ceditest PPV   96孔/盒                             

QYD601  豬傳染性胸膜肺炎 - 抗體檢測ELISA：Ceditest APP     96孔/盒                             

QYD602  豬瘟 - 抗體檢測ELISA      96孔/盒                             

QYD603  豬傳染性胸膜肺炎 - 抗體檢測ELISA      96孔/盒                             

QYD604  豬丹毒 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD605  豬丹毒 - 抗原檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD606  豬傳染性胃腸炎 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD607  豬沙門氏菌 - 抗體檢測ELISA   96孔/盒                             

QYD608  豬流感- 抗體檢測ELISA    96孔/盒                              【卵巢癌組織源性原代細胞】

QYD609  豬流感- 抗原檢測ELISA    96孔/盒                             

QYD610  豬副嗜血桿菌- 抗體檢測ELISA 96孔/盒                             

QYD611  豬輪狀病毒- 抗體檢測ELISA    96孔/盒                             

QYD612  豬輪狀病毒- 抗原檢測ELISA    96孔/盒                             

QYD613  反芻動物弓形蟲抗體檢測ELISA       96孔/盒                             

QYD614  非洲豬瘟抗體檢測試劑盒    96孔/盒                             

QYD615  鯉魚卵黃蛋白原試劑盒       96孔/盒                             

QYD125  豬嗜血桿菌(HPS)檢測試劑盒     96孔/盒 用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中嗜血桿菌(HPS)表達                         

QYD126  雞禽流感H5N1抗體檢測試劑盒 96孔/盒                             

QYD201  雞禽流感H9抗體檢測試劑盒     96孔/盒                             

QYD201  雞傳染性喉氣管炎抗體檢測試劑盒    96孔/盒