【腎癌組織源性原代細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腎癌組織源性原代細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腎癌組織源性原代細胞】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

細胞培養代理品牌

【腎癌組織源性原代細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

336835    Custom Cignal Finder Reporter Array          CNY                                  

336111    Custom ELISArray        CNY                                  

940057    BioSprint 96 DNA Blood Kit (384)        CNY                                  

334471    EpiTect ChIP OneDay Kit (12)             CNY                                  

331260    miScript PreAMP Custom Primer Mix         CNY                                  

331001    RT² miRNA qPCR Assay (200)            CNY                                  

9010969  Plate stacker, detachable Unit for stacking up to ten 96-well plates; for use with the robotic handling system  CNY                            【腎癌組織源性原代細胞】      

9010928  Motor, X, SamTrack, P3xxx        CNY                                  

979302    PyroMark Q24 Cartridge (3) CE   For delivery of nucleotides ａnd reagents for use in PyroMark Q24. CE-Marked CNY                                  

981303    Rotor-Disc 72 (240)             CNY                                  

981005    PCR Tubes, 0.2 ml  (1000)          CNY                                  

9012976  Gripper, left, landoplasted, MTP 120            CNY                                  

931955    QIAsymphony Certal Vaccine NA Kit (96)           CNY                                  

929707    QX Cartridge Stand Cover (1)             CNY                                  

133252    NeXtalStock Sodium phosphate pH 7 (200)         CNY                                  

929606    QX FA Separation Buffer (40 ml)         CNY                                  

9010509  Motor, turntable 1/2 MTP, P3/7            CNY                                  

69525     mericon DNA Bacteria Kit (100)           CNY                                  

69106     DNeasy Plant Mini Kit (250)  250 DNeasy Mini Spin Columns, 250 QIAshredder Mini Spin Columns, RNase A, Buffers, Collection Tubes (2 ml)  CNY                                  

211015    QuantiTect Virus Kit (1000)          CNY                                  

206674    Type-it CNV SYBR Green PCR +qC Kit (400)            CNY                                  

9012763  Liquid Handling Kit Plato 1300             CNY                                  

59568     EpiTect Control DNA (1000)        CNY                            【腎癌組織源性原代細胞】      

979014    MOTT 16S Primers For PCR              CNY                                  

979011    PyroMark Q96 Vacuum Prep Trough (5)     Re-usable plastic troughs for use in all PyroMark Q96 Vacuum Workstations.       CNY                                  

59932     EpiTect MethyLight Assay Hs-ONECUT2(100)    "10-fold primer TaqMan probe mix, for real-time MethyLight PCR

For TaqMan probe-based real-time quantification of methylated or unmethylated CpG sites"    CNY                                  

59695     EpiTect PCR Control DNA Set (100)           CNY                                  

206343    Type-it Mutation Detect PCR Kit (200) "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

Features

 Successful & reproducible analysis of multiple mutations

 Optimization-free multiplex PCR assay development

 Specific ａnd sensitive coamplification of all fragments

 Optimized protocol for fast ａnd reliable results"      CNY                                  

206341    Type-it Mutation Detect PCR Kit (70)   "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

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 Optimized protocol for fast ａnd reliable results"      CNY                                  

9012719  Set, Pins, (6 small, 4 large)           CNY                                  

929561    QX Size Marker 50 - 800 bp v2.0 (50 µl)            CNY                                  

972804    PyroMark Gold Q96 Reagents (5 x 96) "For performing pyrosequencing reaction on the ID (5x 96) ａnd Q96 MD (15x96)

ID needs more reagents"       CNY                                  

301705    HiPerFect Transfection Reagent (1 ml)        CNY                                  

QYC311  鴿腺病毒試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC401  犬細小抗體金標檢測卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC402  犬細小抗原金標檢測卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC403  犬瘟熱抗原金標檢測卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC404  犬衣原體抗體金標檢測卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC405  犬支原體抗體金標檢測卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC406  犬冠狀病毒檢測試紙卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC407  犬腺病毒II 型檢測試紙卡  20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC408  犬副流感病毒檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC409  犬心絲蟲抗原檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC410  犬狂犬病毒抗原檢測試紙卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC411  犬腺病毒1型檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC412  犬流感檢測試紙卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC413  貓瘟病毒檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                         【腎癌組織源性原代細胞】

QYC414  貓傳染性腹膜炎病毒檢測試紙卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC415  貓白血病病毒檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC416  貓免疫缺陷病毒檢測試紙卡       20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC417  利什曼蟲檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC418  鸚鵡熱衣原體檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC419  布氏桿菌抗體檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC420  布氏桿菌抗原檢測試紙卡    20T/盒    抗血清檢測診斷                        

QYC501  蔬菜農藥速測卡    20T/盒    蔬菜農藥殘留檢測                           

QYC502  茶葉農藥速測卡    20T/盒    茶葉農藥殘留檢測                           

QYC503  "糧食農藥速測卡

"      20T/盒    糧食農藥殘留檢測                           

QYC504  蔬菜農藥檢測卡    20T/盒    蔬菜農藥殘留檢測                           

QYC505  高靈敏度農藥速測卡    20T/盒    蔬菜農藥殘留檢測                           

QY101    鹽酸克倫特羅檢測試劑盒    96孔/盒 各種動物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY102    萊克多巴胺檢測試劑盒       96孔/盒 各種動物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY103    沙丁胺醇檢測試劑盒    96孔/盒 各種動物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY104    β-興奮劑檢測試劑盒  96孔/盒 各種動物組織/水產/蜂蜜                          【腎癌組織源性原代細胞】

QY105    呋喃唑酮代謝物檢測試劑盒       96孔/盒 各種動物組織/水產/蜂蜜