【心肌成纖維細胞】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【心肌成纖維細胞】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【心肌成纖維細胞】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

細胞培養代理品牌

【心肌成纖維細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9011875  ZLV Vacuum Trap         CNY                                  

9016874  Kit, Maint. Prot. Plasticware, BR UNIV              CNY                                  

9232338  Cable, RS232, internal chain, BR8000          CNY                                  

9238945  H-motor, BS15              CNY                            【心肌成纖維細胞】   

9238927  Linear conductor, BS15         CNY                                  

9238767  Swing-out rotor for microplate, sealable              CNY                                  

9238755  24 Well Cooling Block 1,5ml         CNY                                  

9238913  Power supply 40W, BS96             CNY                                  

9232323  Cable, power, liquid pump, BR8000             CNY                                  

9232126  Connector, base, dispenser head, BR8000           CNY                                  

9238695  Voltage regulator 7805 DC, 5 V            CNY                                  

9231780  Cable, BioRobot to vac.control box, 1500           CNY                                  

9238676  Lid, speed measurement        CNY                                  

9231514  Screw, 3-way dilutor valve, BR8000            CNY                                  

9231009  Flex Cable 2x10P YQCon1 - Yzadp              CNY                                  

9230995  Predilutionrackaufnahme re.  PK-80           CNY                                  

9020080  Ratchet Holder Set (L&R), TLyser              CNY                                  

9020076  Left Rocker Arm, preassemblied, TLyser            CNY                                  

9020067  Front Panel, TLyser 2           CNY                                  

9020064  Brake 105V DC, TLyser        CNY                            【心肌成纖維細胞】   

9020057  Fan Blade, TLyser         CNY                                  

9020049  Cover with magnet, TLyser          CNY                                  

9015005  DT- Adapter, 300µl, BR8 v3.03            CNY                                  

9014944  AC-Box, 1000W, BR8 RD v1.0            CNY                                  

9014878  Card, x-main, shaker            CNY                                  

9014840  Tubing Set, Syringe Inlet, BR8 RD              CNY                                  

9014712  Cable, Rotor Door Lock, BR8 RD        CNY                                  

9014634  PCB, Rotor-Edge, BR8 RD           CNY                                  

9238607  Teflon disc, motor bearing protection          CNY                                  

9238220  Clamp Tubing        CNY                                  

9240669  Male Quick Disconnect, AP          CNY                                  

9240606  Vacuum Gauge, Digital, AP196/98        CNY                                  

9240601  Sensor w/Cable, Reagent Jar, AP96/196              CNY                                  

QY-x1504       中國倉鼠倉鼠肺細胞R1610                                   

QY-x1505       綠猴猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞RF/6A                                      

QY-x1506       大鼠雪旺細胞RSC96                                      【心肌成纖維細胞】

QY-x1507       豬睪丸細胞系(ST)ST                                     

QY-x1508       蝙蝠肺細胞Tb 1 Lu                                       

QY-x1509       小鼠B細胞雜交瘤細胞W6/32                                      

QY-x1510       鼠纖維肉瘤細胞系WEHI 164                                       

QY-x1511       小鼠B淋巴細胞WEHI 231                                    

QY-x1512       大鼠垂體細胞RPC                                         

QY-x1513       小鼠垂體細胞MPC                                        

QY-x1514       兔子垂體細胞                                         

QY-x1515       狗垂體細胞                                      

QY-x1516       鼠肝癌細胞系MM45T.Li                                       

QY-x1517       小鼠成纖維細胞系McCoy                                     

QY-x1518       大鼠肝癌細胞（乳腺癌細胞接種到肝臟成瘤）Walker-256                                       

QY-x1519       大鼠肝癌細胞（wistar 大鼠）CBRH7919                                    

QY-x1520       小鼠結腸癌C26                                      

QY-x1521       穩定轉染了neor和LIF基因的STO細胞株SNL                                       

QY-x1522       小鼠艾氏腹水瘤細胞ECA                                      【心肌成纖維細胞】

QY-x1523       褐鼠胰島素瘤上皮細胞RIN-m                                     

QY-x1524       小鼠雜交瘤細胞ST2/o                                   

QY-x1525       小鼠腎癌細胞RenCa                                      

QY-x1526       小鼠胰島素瘤β細胞（NOD/Lt轉基因小鼠，SV40巨T抗原）NIT-1                                    

QY-x1527       早代小鼠胚胎成纖維細胞MEF                                     

QY-x1528       中國倉鼠肺細胞V79                                      

QY-x1529       兔的肝細胞VX2                                     

QY-x1530       雞胚原代肝細胞CEL                                      

QY-x1531       129小鼠ES細胞D3                                       

QY-x1532       129小鼠ES細胞E14                                     

QY-x1533       BALB/c小鼠ES細胞B/c-ES                                         

QY-x1534       猴的骨髓間充質干細胞MSCS