【骨細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【骨細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【骨細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【骨細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9014579  QIAVac Multiwell    Vacuum manifold for processing 96-well purification plates of SBS standard     CNY                                  

9022581  PCB - Mainboard(progr.)Biocontrol,RGQII         CNY                                  

9022409  RCS Tip Eject Station v.2             CNY                                  

9022130  Optical Head Assembly, careHPV         CNY                                  

9022125  Tool, Thermistor Gauge, RGx              CNY                                  

9021983  Latching mechanism (2), top lids, QXA              CNY                                  

9021290  Silicone grease for PM, EZ1         CNY                                  

9238617  Magnet, tacho        CNY                                  

9238473  Rotary flex circuit, BR RapidPlate        CNY                                  

9238240  BioRobot M48 User Manual          CNY                            【骨細胞總DNA】     

9238225  Sheath Delivery Tubing w. Connectors        CNY                                  

9238158  Heat Transfer Adapter, microplate FB          CNY                                  

9240660  Block, Plastic, QC, AP96/196              CNY                                  

9240651  Internal BCR, Keyence, BL-180, AP96/196          CNY                                  

9240626  Fuse, 8amp, 5 X 20 mm, AP196/98             CNY                                  

9240623  Circuit Breaker, 2A, AP196/98             CNY                                  

9240591  3-Way Mac Valve, AP196/96         CNY                                  

9240574  Micro-Lynx w\speedbaord, AP98         CNY                                  

9240572  Rotor w/Buckets, Sorvall, AP96           CNY                                  

9240552  Freq. Conv., PCB, Eppendorf, AP196/98             CNY                                  

9240531  Cable, Motor, Axis #7, Pump U/D, AP98             CNY                                  

9240564  Fan, Condenser, 230V,Eppendorf, AP196/98        CNY                                  

9240553  Cable, PC-104 to Eppendorf, AP196/98              CNY                                  

9240548  Motor Cap Repair, Eppendorf, AP196/98             CNY                                  

9240515  I/O PCB, Main Board, AP196/98          CNY                                  

9240503  PM Kit, AP196              CNY                            【骨細胞總DNA】     

9239958  BR M48, PM Service     "Service response time (repair): not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes

 Inspection/maintenance delivery: onsite

Cost coverage for Repair Parts : not included

Cost coverage for labor: yes, full coverage

Cost coverage for travel: yes, full coverage

Replacement system (Loaner) provision: not applicable

Transportation cost coverage: yes, full coverage" CNY                                  

9239853  Foot, complete, v2.0 (4)              CNY                                  

9239572  BR Universal, Full Agreement The Full Agreement BR Universal provides full service coverage for the BioRobot Universal System. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 48 hours (2 working days).       CNY                                  

9239563  Assy,Kit,Retrofit,HoriCompressorMnt          CNY                                  

9020033  LED UV (325), RGQ            CNY                                  

9020023  L 26_7 Firmware, DML2             CNY                                  

9019975  PCB, UV light assembly, Cxx        CNY                                  

QY-x859  BHK-21敘利亞倉鼠腎細胞系                                        

QY-x860  CHO-K1中國倉鼠卵巢細胞系                                       

QY-x861  P3/NS1/1-Ag4-1鼠骨髓瘤細胞                                      

QY-x862  SP2/0-Ag14鼠骨髓瘤細胞                                     

QY-x863  P3X63-Ag8.653鼠骨髓瘤細胞                                      

QY-x864  B6YH4雜交瘤細胞（B6YH4）枝原體陽性                                         

QY-x865  B82鼠細胞系                                   

QY-x866  CoC1人卵巢癌細胞系                                    

QY-x867  CoC1/DDPCoC1細胞耐藥亞株                                     

QY-x868  Hep-2人喉癌細胞系                                       

QY-x869  KMB-17人二倍體細胞系                                       

QY-x870  WI-38人二倍體細胞系                                   

QY-x871  MRC-5人二倍體細胞系                                         【骨細胞總DNA】

QY-x872  HL人二倍體細胞系                                        

QY-x873  Hela人宮頸癌細胞系                                      

QY-x874  Hela/DDP Hela細胞耐藥亞株                                         

QY-x875  H9人T淋巴細胞系                                        

QY-x876  K562慢性骨髓性白血病細胞系                                    

QY-x877  Wish人羊膜細胞系                                        

QY-x878  HL-60早幼粒急性白血病細胞系                                   

QY-x879  MOLT-4淋巴母細胞性白血病細胞系                                   

QY-x880  A431表皮癌細胞系                                        

QY-x881  L-02人胎肝細胞系                                         

QY-x882  Hut-102人T淋巴瘤細胞系                                    

QY-x883  MCF-7人乳腺癌細胞系                                         

QY-x884  ZR-75-30人乳腺癌細胞系                                     

QY-x885  PK-15豬腎細胞系                                   

QY-x886  IBRS-2豬腎細胞系                                        

QY-x887  ST豬睪丸細胞系                                     【骨細胞總DNA】

QY-x888  Sf-21昆蟲細胞系                                    

QY-x889  SF-9昆蟲細胞系