【腦成纖維細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腦成纖維細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腦成纖維細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

細胞培養代理品牌

【腦成纖維細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019374  Housing, bearing w/coupling, motor, RG6           CNY                                  

9019362  Connector USB, serial internalcabl, RG6             CNY                                  

9019353  Flap, cooling, RG6        CNY                                  

1027411  FlexiPlate siRNA - 0.1 nmol          CNY                                  

1027310  Negative Control siRNA (20 nmol)              CNY                                  

1027298  AllStars Cell Death Contr.siRNA (5nmol)             CNY                                  

9019341  LED, yellow (585), RG6              CNY                                  

9234712  Board, level sensor, BR8000 v1.02              CNY                                  

9020469  Peltier module, GSC             CNY                                  

9234541  Pumphead click＇n＇go; HSPS; BR3/9604        CNY                                  

9234462  Coupling, CPC, inline, male, 8mm        CNY                                  

9234406  Valve solenoid, 5-fold, 0        CNY                            【腦成纖維細胞總DNA】  

9234321  Power supply, 24V, BR8000         CNY                                  

9019230  Keypad, PyroQ24          CNY                                  

9237170  Sample Needle Height Alignment Kit            CNY                                  

9233173  Board, YZ-adapter, BR8000          CNY                                  

9237157  LED Board XYP            CNY                                  

9237124  Upgrade App., MinElute 96    Take advantage of our instrumentation ａnd molecular biology expertise to install MinElute 96  on your BioRobot System.  The onsite protocol development visit includes all travel ａnd labor for the visit to install the standard QIAGEN MinElute 96 protocol, plus a MinElute 96 BioRobot Kit (4-plate) Cat # 28051    CNY                                  

9237099  Upgrade BR configuration, on site        CNY                                  

9236424  Motor, rotary, TWI        CNY                                  

9232970  YZ 96 Connector Board 2 (Arm), E10103           CNY                                  

9236409  Plate Stacker TW I, microplate            CNY                                  

9236357  Sample Holder Large, 1.5ml          CNY                                  

9232911  Board, YZ driver            CNY                                  

9236336  Analog Board         CNY                                  

9236158  Pot. , syr. or vert. , kit, RapidPlate              CNY                                  

9236149  Locator Plate, 96 well,pos 4-5,BR RP          CNY                                  

9236114  O-Ring, Coupling, RoboVac, BR8 RD v4.2          CNY                            【腦成纖維細胞總DNA】  

9236107  Flange Tool            CNY                                  

9230680  Probe, 0.4 mm, BR8000 v1.01             CNY                                  

9230478  Rack f. Diamend Gel Cards (holds 6cards)          CNY                                  

9230473  Set, Cables, PCB (X-main) to shaker           CNY                                  

9235646  Connector, Board, HS shaker, BR8000 v1.0         CNY                                  

QY-x797  Bcap-37乳腺癌                                       

QY-x798  HeLa宮頸癌                                     

QY-x799  ZR-75-30乳腺癌                                     

QY-x800  HeLa229宮頸癌                                      

QY-x801  MCF-7乳腺腺癌                                     

QY-x802  KB-C1.5宮頸癌                                       

QY-x803  SK-BR-3乳腺腺癌                                   

QY-x804  HCC子宮高分化鱗癌                                     

QY-x805  MDA-MB-435S乳腺管癌                                       

QY-x806  JAR胎盤絨毛癌                                      

QY-x807  T47D乳腺管癌                                        【腦成纖維細胞總DNA】

QY-x808  RD惡性胚胎橫紋肌瘤                                    

QY-x809  HBL-100乳腺細胞                                   

QY-x810  BT-325神經膠質瘤                                        

QY-x811  SMC-1惡性胸膜間皮瘤                                         

QY-x812  SK-N-SH神經母細胞瘤                                         

QY-x813  A2肺癌                                    

QY-x814  SHG-44膠質瘤                                       

QY-x815  95-D高轉移肺癌                                     

QY-x816  A375惡性黑色素瘤                                        

QY-x817  Calu-3肺腺癌 （胸膜滲出液）                                    

QY-x818  Bowes Melanoma黑色素瘤                                    

QY-x819  LTEP-a-2肺腺癌                                     

QY-x820  MM96L黑色素瘤                                    

QY-x821  SH-77小細胞肺癌                                   

QY-x822  J-111單核細胞白血病                                    

QY-x823  NCI-H446小細胞肺癌                                     【腦成纖維細胞總DNA】

QY-x824  Dami巨核細胞                                        

QY-x825  SPC-A-1肺腺癌                                      

QY-x826  CHMas肥大細胞白血病                                        

QY-x827  SGC-7901胃腺癌