【腸平滑肌細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腸平滑肌細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腸平滑肌細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【腸平滑肌細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9013425  Maintenance Kit BR 9604      "See Components tab for what comes in this kit.

Also includes 4x9013641, BGR Valve 4-port for P1/3 Syringe Pump; 1.5m of 9233214 (listed in Components as qty of 1)." CNY                            【腸平滑肌細胞總DNA】  

9019668  PCB - Valve, PyroQ24           CNY                                  

9019649  Fuse kit (6.3Ax10, 5Ax5), PyroQ96            CNY                                  

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9019585  Slideout electrical tray, QGY         CNY                                  

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9019532  Tip ejector, QGY           CNY                                  

204163    QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)    The supplied, ready-to-use ｍaster mix contains SYBR Green I dye, ROX passive reference dye, HotStarTaq DNA Polymerase, ａnd a dNTP mix in an optimized buffer. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. The UNG enzyme is provided separately. For convenience, the ｍaster mix can be stored at 2–8°C.       CNY                                  

204141    QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)  "Trial kit size for 40 x 50 ul reactions: 1.7 ml QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2.0 ml RNase-free water

For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green detection."       CNY                                  

9019428  Sensor, source home, RG3           CNY                                  

9019397  Belt, toothed, rotor drive, RG3             CNY                                  

9019350  Heater assembly, element, sensors, RG6             CNY                                  

1027415  FlexiTube siRNA 1 nmol              CNY                                  

9019336  Connector, JP5, Hi, Med, Lo, RG6              CNY                                  

QY-x580  L1210小鼠淋巴細胞白血病                                   

QY-x581  RBL-1大鼠嗜堿性粒細胞白血病                                   

QY-x582  MV-1-Lu鼬肺上皮細胞                                         

QY-x583  NIH3T3小鼠胚胎成纖維細胞                                        【腸平滑肌細胞總DNA】

QY-x584  293人胚腎細胞                                       

QY-x585  L929小鼠成纖維細胞                                     

QY-x586  293T人胚腎T細胞                                        

QY-x587  HSC-T6大鼠肝星狀細胞                                       

QY-x588  GES-1人胃粘膜細胞                                      

QY-x589  L-02人肝細胞                                         

QY-x590  Lewis肺癌細胞                                       

QY-x591  EAC艾氏腹水瘤細胞                                     

QY-x592  LA795肺腺癌細胞                                         

QY-x593  S180腹水瘤細胞                                     

QY-x594  H22肝癌細胞                                   

QY-x595  B16黑色素瘤細胞                                   

QY-x596  MPC-83胰腺腺泡癌細胞                                       

QY-x597  C3白血病細胞                                        

QY-x598  RIN-m5Fβ胰島素瘤                                      

QY-x599  L1210淋巴白血病細胞                                    【腸平滑肌細胞總DNA】

QY-x600  MA891乳腺癌細胞                                        

QY-x601  TA2自發高乳腺癌細胞                                         

QY-x602  SP2/0骨髓瘤細胞                                   

QY-x603  U14宮頸癌細胞                                      

QY-x604  YAC-1淋巴瘤細胞                                   

QY-x605  G422神經膠質瘤細胞                                    

QY-x606  TC-1HPV16，E6,E7和ras基因共轉化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞                                      

QY-x607  SRA01/04人晶體上皮細胞系                                        

QY-x608  MCF-7乳腺腺癌細胞                                     

QY-x609  CNE-1高分化鼻咽癌細胞                                      

QY-x610  MEF-7/Adr乳腺腺癌阿霉素耐藥株