【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019222  Power Supply - Instr., PyroQ24           CNY                                  

9019207  Cable - X  robot, PyroQ96MD           CNY                                  

1066845  PG AIV-H5 RT-PCR Assay (48) LE Z          CNY                                  

1066852  FMDV RT-PCR REAGENT LE            CNY                                  

1060993  Buffer MW2 (87ml)              CNY                                  

1054578  HiSpeed Plasmid Mega EF Kit (5)         CNY                                  

1061091  HCV RT-PCR REAGENT VI        CNY                                  

1061095  HSV PCR REAGENT II        CNY                            【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

1061100  HCMV Quantification Standards           CNY                                  

1061102  TB PCR REAGENT I           CNY                                  

1061106  MP Quantification Standards         CNY                                  

9016732  Security Key, LC Policy Manager, encoded         CNY                                  

9019887  Lid, label BC1, RG3              CNY                                  

9019884  Cover, main, label CoResearch, RG3           CNY                                  

9019883  Optical source ａnd detector assy , RG3              CNY                                  

9019767  Sensor, interlock1, with cable, QX              CNY                                  

9238801  Round Bucket w/ thread, sealable w/ cap     Sigma part no. 13350     CNY                                  

9019725  Rotor-Disc Heat Sealer 230V        CNY                                  

9019663  PyroMark Vac Prep Tool, PyroQ96VW        CNY                                  

9019618  Motor, Z-axis, Cx2        CNY                                  

9019615  Pipettor, spring, Cx2             CNY                                  

9019600  O-ring, filter housing seal, 2mm, CX1         CNY                                  

9019572  Pulley, Idler X-axis, Cxx              CNY                                  

9019569  Stop pin, X-axis, Cxx           CNY                            【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

9019536  Pipetting Station RD, RCS            CNY                                  

9019534  Home flag, Z-axis, CQx        CNY                                  

9019531  UV light assembly, QIA         CNY                                  

9019396  Motor, stepper, rotor drive, RG3          CNY                                  

9019352  Solenoid, cooling flap, RG6          CNY                                  

9019351  Fan, cooling blower, RG6             CNY                                  

9019334  Kit, Heater FET & drivers, RG6           CNY                                  

9234763  cable, flat band, 1500 mm            CNY                                  

9234433  Boundary, SIS, rigth             CNY                                  

QY-AC062      小鼠白血病細胞 L1210       L1210                                

QY-AC063      大鼠主動脈平滑肌細胞 A7r5     A7r5                                  

QY-AC064      大鼠肝細胞瘤細胞 H-4-II-E       H-4-II-E                             

QY-AC065      小鼠結腸細胞 CT26    CT26                                 

QY-AC067      小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0-S    SP2/0-S                             

QY-AC069      小鼠胰島內皮細胞 MS1      MS1                                  

QY-AC070      小鼠骨髓瘤細胞 NS-1P3/NSI/1-Ag4-1      NS-1P3/NSI/1-Ag4-1                               

QY-AC071      小鼠逆轉錄病毒包裝株 PT-67    PT-67                                

QY-AC072      小鼠肺上皮細胞 TC-1 TC-1                                  

QY-AC073      大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞高分化 PC-12Well-differentiated        PC-12Well-differentiated                                  

QY-AC074      大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞未分化 PC-12Undifferentiated     PC-12Undifferentiated                               

QY-AC075      小鼠腎小球系膜細胞 SV40-MES-13  SV40-MES-13                                  

QY-AC076      小鼠Lewis肺癌細胞 LLC   LLC                            

QY-AC077      中國倉鼠卵巢懸浮細胞biohermes CHO-S  CHO-S                               

QY-AC078      中國倉鼠卵巢細胞invitrogen CHO-S  CHO-S                                【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-AC079      倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr-      CHO/dhFr-                                

QY-AC080      小鼠淋巴瘤細胞 L5178Y TK+/- clone 3.7.2C    L5178YTK+/-clone3.7.2C                                

QY-AC081      小鼠乳腺癌高轉移細胞 MA-891 MA-891                             

QY-AC082      小鼠宮頸癌細胞 U14   U14                            

QY-AC083      小鼠胰島素瘤胰島β細胞 Beta-TC-6 Beta-TC-6                                 

QY-AC084      小鼠睪丸間質細胞 TM3     TM3                                  

QY-AC085      猴腎細胞 Marc145       Marc145CRL-12231                                 

QY-AC086      小鼠白血病細胞 P388  P388                                  

QY-AC087      大鼠成骨細胞 ROS1728      ROS1728                                  

QY-AC088      非洲綠猴SV40轉化的腎細胞 COS-7       COS-7                               

QY-AC089      小鼠胚胎細胞 NIH/3T3       NIH/3T3                            

QY-AC090      小鼠黑色素瘤細胞 B16F1   B16F1                                

QY-AC091      大鼠腎細胞 NRK-52E  NRK-52E                                  

QY-AC093      鼠肝星形細胞 CFSC-8B      CFSC-8B                            

QY-AC094      鼠肝星形細胞 CFSC-2G     CFSC-2G                                  

QY-AC095      人/鼠雜交骨髓瘤細胞 K6H6/B5  K6H6/B5                             【膽道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】