【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

1061051  HBV PCR REAGENT II        CNY                                  

9019890  Foam insert, rotor securing, QIAC              CNY                                  

9019861  Rotor Locking Nut Set          CNY                                  

9019821  IQ/OQ document, QS           CNY                                  

9019768  Sensor, interlock2, with cable, QX              CNY                                  

9019765  Belt, Y, V2, QX             CNY                                  

9019727  Board, transport conversion, V2, QX           CNY                                  

9013523  Underlay, vaccum manifold, v2.01              CNY                                  

9013447  Control unit Y/Z, 4 channel           CNY                                  

9013431  Maintenance kit, semi annual, BR9600 (E)           CNY                            【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

9238807  Round carrier for 12 Tubes 15ml         CNY                                  

9019715  PyroMark Q24 User Manual         CNY                                  

9019648  Mixer module w. top plate, PyroQ96ID        CNY                                  

9019643  Sensor, solenoid, EZ1xl         CNY                                  

9019589  Cable harness, x axis, C34            CNY                                  

9019587  PCB, mainboard, QGY          CNY                                  

9019582  End cap, Y-arm, Cxx             CNY                                  

9019551  Fuse, 2A        CNY                                  

9019513  Adapter, reagent tub plate, CX1            CNY                                  

9019502  TANK UPPER BUFFER ASSY GS        CNY                                  

218073    miScript SYBR Green PCR Kit (200)           CNY                                  

218061    miScript Reverse Transcription Kit (50)              CNY                                  

217504    miRNeasy FFPE Kit (50)              CNY                                  

9019441  Mother board ( micro board V 2.1 )            CNY                                  

204245    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (1000)       For 1000 x 50 ul reactions:  25 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix (providing a final concentration of 2.5 mM MgCl2), 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-free water   CNY                                  

204156    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)        CNY                            【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

204074    Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400)      The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green I.      CNY                                  

9019432  Hose, cooling blower, RG3           CNY                                  

9019423  Belt, toothed, source optics, RG3         CNY                                  

9019394  Gasket, cooling flap, RG3            CNY                                  

9019385  EPROM, IC main board, state F/W, RG3            CNY                                  

9019367  Gasket, lower chamber, RG6        CNY                                  

1027419  Flexitube siRNA 20 nmol W Modification            CNY                                  

QY-HC0151    人神經母細胞瘤細胞 SK-N-SH  SK-N-SH                            

QY-HC0152    人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358 NCI-H358                                 

QY-HC0153    人肺腺癌細胞 NCI-H1975   NCI-H1975                                

QY-HC0154    人巨核細胞白血病細胞 DAMI   DAMI                                

QY-HC0155    人支氣管上皮細胞 HBE      HBE                            

QY-HC0156    人膠質母細胞瘤細胞 A172 A172                                  

QY-HC0157    人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞 RT4      RT4                            

QY-HC0158    人乳腺腺癌細胞 MDA-MB-436  MDA-MB-436                            

QY-AC1446    大鼠心肌細胞 H9C22-1       H9C22-1CRL-1446                            

QY-AC9.1       小鼠肝上皮細胞 NCTC clone 1469 [derivative of NCTC 721   NCTCclone1469[derivativeofNCTC721CCL-9.1                             

QY-AC34 馬-達二氏犬腎細胞系 MDCK NBL-2 MDCKNBL-2CCL-34                               

QY-AC2528    豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75 PT-K75CRL-2528                             

QY-AC2389    小鼠胰腺癌細胞 LTPA LTPACRL-2389                                 【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-AC2132    大鼠胰腺癌細胞 DSL-6A/C1     DSL-6A/C1CRL-2132                               

QY-AC2016    小鼠骨髓瘤B淋巴細胞 SP2/MIL-6   SP2/MIL-6CRL-2016                               

QY-AC2005    大鼠腦間質細胞 DI TNC1  DITNC1CRL-2005                            

QY-AC1772    小鼠肌原細胞 C2C12   C2C12CRL-1772                               

QY-AC173      小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-L1     3T3-L1CCL-173                               

QY-AC1589    大鼠回腸細胞 IEC-18  IEC-18CRL-1589                              

QY-AC1586    非洲綠猴腎細胞 VERO C1008 [Vero 76, clone E6, Vero E6]   VEROC1008[Vero76,cloneE6,VeroE6]CRL-1586                             

QY-AC1581    小鼠骨髓瘤細胞 Sp2/0-Ag14      Sp2/0-Ag14CRL-1581                              

QY-AC141　 鴨子胚胎成纖維細胞Duck embryo　 Duckembryo　CCL-141                                  

QY-AC12203  雞胚胎成纖維細胞 UMNSAH/DF-1    UMNSAH/DF-1CRL-12203                              

QY-AC71 小鼠巨噬細胞 RAW 264.7   RAW264.7TIB-71                             

QY-AC10 倉鼠腎成纖維細胞 YXK-21 YXK-21CCL-10                                

QY-AC2007    小鼠表皮細胞 JB6 Cl 30-7b JB6Cl30-7bCRL-2007                               

QY-AC1658    小鼠胚胎細胞 NIH/3T3       NIH/3T3CRL-1658                            

QY-AC2586    小鼠血管內皮瘤細胞 EOMA      EOMACRL-2586                               

QY-AC1503    小鼠胚胎纖維細胞 STO     STOCRL-1503                                   【直腸腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-AC001      大鼠肝上皮樣干細胞 WB-F344  WB-F344                                  

QY-AC002      小鼠乳腺癌細胞 4T1   4T1