【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019565  Clamp, cable 2 wires 2 tabs, Cxx         CNY                                  

9019543  Bow spring, table rail, Cxx           CNY                                  

9019510  CHAMBER MAIN VAC STATION 1820              CNY                                  

9019505  PLATE SEPARATOR 48 WELL HIGH         CNY                                  

204256    QuantiFast Probe PCR Kit (2000)         CNY                                  

204174    Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit (400) The Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I.  CNY                                  

204154    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)         CNY                                  

9019424  Wiring, lower heater, RG3            CNY                                  

9019417  Fan, lid, RG3         CNY                                  

9019393  Solenoid, cooling with flap, RG3          CNY                                  

9019386  Photo Multiplier Tube with cable, RG3        CNY                                  

9019368  Damper, lid, RG6          CNY                            【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】     

9019347  Motor, 12VDC Heater fan, RG6           CNY                                  

9234697  Manual Hardware Plato 7             CNY                                  

9020477  Gasket, front plate, GSC              CNY                                  

9234463  Coupling, CPC, inline, female, 8mm            CNY                                  

1027285  AllStars Neg. siRNA AF 546 (5 nmol)          CNY                                  

1022564  Mm/Hs_MAPK1 control siRNA (5 nmol)            CNY                                  

9019205  Opto - Stacker, PyroQ96MD        CNY                                  

9019204  Opto - Robot Z motor , PyroQ96MD           CNY                                  

9019200  Hinge kit - Top cover, PyroQ96MD             CNY                                  

1022073  Luciferase GL3 siRNA (5 nm)             CNY                                  

1022064  GFP-22 siRNA (5 nm)          CNY                                  

1018996  PCR Buffer, 10 x (22ml/30),KG           CNY                                  

1064605  MagAttract M48 DNA Manual Kit  (200)           CNY                                  

1066851  PG FMDV RT-PCR Assay (48) LE Z           CNY                                  

1061054  HBV PCR REAGENT I         CNY                                  

1061069  UU PCR REAGENT II          CNY                            【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】     

1061079  NG PCR REAGENT II         CNY                                  

9019886  Lid, label 4CH, RG3              CNY                                  

9019875  Cover, main, silver, RGQ              CNY                                  

9019836  IPC Hard Drive PCA6751,  PyroQ96ID             CNY                                  

9019769  Valve, shutoff, V2, QX          CNY                                  

QY-HC084      表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞 293FT  293FT                                

QY-HC085      人肺鱗癌細胞系 NCI-H226 NCI-H226                                 

QY-HC086      人慢性骨髓性白血病細胞系 K562     K562                                  

QY-HC087      人舌癌細胞 Tca-8113   Tca-8113                            

QY-HC089      人胚腎上皮包裝細胞 GP2-293   GP2-293                            

QY-HC090      高轉移人肝癌細胞 LM3      LM3                                  

QY-HC091      高轉移人肝癌細胞 MHCC97-H   MHCC97-H                               

QY-HC092      低轉移人肝癌細胞 MHCC97-L   MHCC97-L                                

QY-HC093      人腎小管上皮細胞系HK-2  HK-2                                  

QY-HC094      人子宮內膜腺癌細胞 HEC-1-A   HEC-1-A                            

QY-HC095      人子宮內膜腺癌細胞 HEC-1-B   HEC-1-B                             【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-HC096      人Ishikawa子宮內膜癌細胞 ISK       ISK                             

QY-HC097      人子宮內膜腺癌細胞 AN3CA     AN3CA                              

QY-HC098      人神經母細胞瘤細胞 IMR-32     IMR-32                              

QY-HC099      人皮膚成纖維細胞 HSF      HSF                            

QY-HC0100    人Burkitt淋巴瘤細胞 RAJI RAJI                                  

QY-HC0101    人B淋巴細胞急性白血病細胞 BALL-1     BALL-1                              

QY-HC0102    人宮頸癌細胞 Hela-s3  Hela-s3                               

QY-HC0103    人卵巢癌細胞 HO-8910      HO-8910                            

QY-HC0104    人腎小球系膜細胞 HMC     HMC                                  

QY-HC0105    人小細胞肺癌細胞 NCI-H446     NCI-H446                                 

QY-HC0106    人骨髓瘤細胞/人漿細胞白血病細胞 NCI-H929      NCI-H929                                 

QY-HC0108    人胚肺成纖維細胞 HELF    HELF                                 

QY-HC0109    人飼養層上皮細胞 HPT-8   HPT-8                                

QY-HC0110    人非小細胞肺癌細胞人肺支氣管癌細胞 NCI-H1650　   NCI-H1650　                            

QY-HC0111     人大細胞肺癌細胞 NCI-H661　 NCI-H661　                              

QY-HC0112    人外周血嗜堿性白血病細胞 KU812   KU812                                【肝腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-HC0113    人乳腺導管癌細胞 MDA-MB-435      MDA-MB-435                            

QY-HC0114    人骨髓瘤細胞 OPM-2        OPM-2                               

QY-HC0115    人腺癌細胞 F56   F56                             

QY-HC0116    人SV－40轉化肺成纖維細胞 WI-38VA13       WI-38VA13