【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】下面是細胞株培養的具體無菌技術要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基完全相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養條件

1、培養基：RPMI-1640 培養基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】五、培養方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml 培養液繼續培養。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養代理品牌

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【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業生產和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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1026883  MagAttract Suspension G (1,6/2),KG          CNY                                  

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9019546  Clamp, cable, 3 wires 2 tabs, Cxx        CNY                                  

9019533  PCB, USB, QGY           CNY                            【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

9019518  RISER VACUUM 16.25MM          CNY                                  

217004    miRNeasy Mini Kit (50)        CNY                                  

204243    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)  For 200 x 50 ul reactions: 3 x 1.7 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix,* 100 ul QuantiTect RT Mix, 2 x 2.0 ml RNase-free water  CNY                                  

QY-HC018      人肺成纖維細胞 HFL1 HFL1                                 

QY-HC020      人肝星形細胞 LX-2     LX-2                                  

QY-HC021      張氏肝細胞 Chang Liver      ChangLiver                                

QY-HC022      表達HBV病毒的人肝細胞 HepG2.2.15     HepG2.2.15                               

QY-HC023      人非小細胞肺癌細胞 HCC827    HCC827                             

QY-HC024      人大細胞肺癌細胞 NCI-H460     NCI-H460                                 

QY-HC025      人結腸腺癌細胞 SW480     SW480                               

QY-HC026      人肝癌細胞 BEL-7404  BEL-7404                                  

QY-HC027      人胃癌細胞 NCI-N87   NCI-N87                             【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-HC028      人鼻咽低分化鱗癌細胞株 SUNE-1    SUNE-1                             

QY-HC029      人胚腎細胞 293[HEK-293；HEK293]　    293[HEK-293；HEK293]　                              

QY-HC030      人SV40轉染成骨細胞 hFOB 1.19     hFOB1.19                                  

QY-HC031      人乳腺導管癌細胞 BT474   BT474                                

QY-HC032      人肺黏液上皮樣癌細胞NCI-h1688改為NCI-H292　      NCI-h1688改為NCI-H292　                                 

QY-HC033      人表皮癌細胞  A431    A431                                  

QY-HC034      人乳腺癌細胞 MDA-MB-175      MDA-MB-175                            

QY-HC035      人宮頸癌細胞 HeLa     HeLa                                  

QY-HC036      人胃腺癌細胞 SGC-7901    SGC-7901                                 

QY-HC037      人食管癌細胞 EC9706 EC9706                              

QY-HC038      人食管癌細胞 ECA109 ECA109                             

QY-HC039      人卵巢癌細胞 SKOV3  SKOV3                              

QY-HC041      人肺癌細胞株 A549     A549                                  

QY-HC042      人骨肉瘤細胞 MG-63  MG-63                               

QY-HC043      人骨髓瘤細胞 U266U266B1 U266U266B1                             

QY-HC044      人骨髓瘤細胞 3T3D    3T3D                                  【食道腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-HC045      人乳腺癌細胞 MCF-7  MCF-7                               

QY-HC046      人組織細胞淋巴瘤細胞 U-937    U-937                                

QY-HC047      人纖維肉瘤細胞 HT1080    HT1080                              

QY-HC048      人胚腎細胞 AD293      AD293                               

QY-HC049      人涎腺腺樣囊性癌細胞 ACC3    ACC3                                 

QY-HC050      人結直腸腺癌上皮細胞 DLD-1  DLD-1