細胞裂解活性是清除細胞內病原體和癌細胞的重要過程。ICT的總細胞毒性檢測試劑盒允許您評估細胞培養中的細胞溶解活性�？偧毎拘詼y定試劑盒包括三種熒光試劑：CFSE、7-AAD和SR-FLICA。CFSE是一種綠色熒光膜染色劑，用于識別目標細胞群。加入未染色的效應細胞并與靶細胞孵育。SR-LFICA試劑與細胞一起孵育以鑒定那些含有活性胱天蛋白酶的細胞。然后加入7-AAD，一種紅色熒光活/死染色劑，通過結合膜受損細胞的DNA將所有壞死細胞染成紅色。通過流式細胞術，量化四種細胞群：活細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞�？偧毎拘栽噭┖兄械倪@種進一步的細胞分化導致更準確的細胞溶解活性評估。

ImmunoChemistry艾美捷總細胞毒性試驗試劑盒化學性質：

試劑名稱7-AAD、CFSE、SR-VAD-FMK

靶細胞介導的細胞毒性，多胱天蛋白酶

激發/發射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm SR-FLICA–565 nm/600 nm

分析方法流式細胞術

樣品類型細胞培養

存儲CFSE≤ -20°C，2-8°C時的其他部件

協議：

準備樣品和對照品

用diH2O稀釋1:10的分析緩沖液并過濾消毒。

用200µL DMSO重新配制CFSE，并用1X測定緩沖液稀釋1:250。

向目標細胞中加入200µL CFSE，使其呈綠色，并在室溫下孵育15分鐘。

清洗目標細胞并調整細胞濃度。

向靶細胞中加入效應細胞并孵育4-6小時。

用100µL DMSO重組SR-FLICA并稀釋1:12.6。

添加10µL SR-FLICA，將凋亡細胞標記為橙紅色，并在37°C下孵育45分鐘。

用260µL DMSO重組7-AAD，并用1X測定緩沖液稀釋1:10。

加入20µL 7-AAD標記壞死細胞為紅色，并在冰上孵育10分鐘。

運行對照并用流式細胞儀進行分析。通過分析FL-1（綠色）與FL-3（紅色）來識別目標細胞。創建FL-2（橙色-紅色）與FL-3（紅色）的繪圖。CFSE在492nm激發，在520-540nm發射；7-AAD在546nm激發并在647nm發射；SR-FLICA在565nm激發，在600nm發射。

ImmunoChemistry艾美捷總細胞毒性試驗試劑盒組分：

Kit 971: 125 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 1 vial, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 972: 250 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 2 vials, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies簡稱"ICT",提供各種細胞蛋白酶、細胞凋亡與細胞毒性檢測試劑盒等研究工具，同時包含高質量高靈敏度的 ELISA開發試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml