Jackson丨艾美捷直接-一步法：

在直接檢測方法中（圖1（A）），直接結合報告酶或熒光染料的一抗體用于在單個培養步驟后檢測印跡膜上的蛋白質抗原。雖然這種一步法更快，但并沒有廣泛使用。圖1（B）說明了直接結合一抗體的問題，報告分子可以阻斷一抗體中的抗原結合區域，從而阻止對抗原的良好識別，并導致靈敏度降低。過量的一次可補償這種影響，但可能導致再現性差和背景增加。

Jackson丨艾美捷間接-兩步法：

Western印跡的兩步間接檢測方法避免了對抗原檢測的干擾。未標記的一抗體與抗原結合在印跡膜上形成復合物。清洗后，用與報告酶或熒光團結合的二抗體培養印跡。多個二抗體與一抗體上的表位結合，形成標記的抗原抗體復合物（圖1（C））。雖然間接法需要更多的洗滌和培養步驟，但與直接法相比，它具有許多優點，包括信號放大和靈活性。

圖1：（A） 直接結合的一抗體結合結合在膜上的抗原。（B） 由于報告酶或熒光團可以結合到抗原結合區并降低抗體對其靶點的親和力，所以直接結合的一抗體和結合在膜上的抗原結合較差。使用輔助設備可以消除這種情況。（C） 間接方法-多重共軛二抗體與未標記物一抗體結合。

直接和間接檢測方法適用于Western blotting，但也可能與其他技術相關，如IHC/ICC、ELISA和流式細胞術。

Jackson直接和間接免疫印跡法文獻參考：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson ImmunoResearch注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務于大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml