在這里，艾美捷Jackson詳細介紹了如何建立多重標記實驗，以及執行成功分析所需的一些注意事項。

圖：小鼠GFAP（綠色）、NF（紅色）、膠原蛋白IV（灰色）、波形蛋白（藍色）z1。圖片由加州大學圣巴巴拉分校神經科學研究所Gabe Luna提供。

Jackson丨艾美捷：設計多重標記實驗

同時檢測一種以上抗原的抗體選擇取決于至少兩個重要標準：

Jackson丨艾美捷：二抗體的可用性不識別

彼此（來自相同的寄主物種），

分析系統中使用的其他初抗體，

研究中的組織或細胞中存在內源性免疫球蛋白。

使用分辨率良好的探針（酶反應產物、熒光團或電子致密顆粒）。

多標簽協議生成器

這個工具可以幫助你設計實驗。它將應用上述標準來確定一抗體之間的潛在交叉反應性，從而確定每個二抗體所需的zui小交叉反應性。

輸入樣本的種類和您打算使用的抗體。優先對所有二抗體使用相同的宿主物種，以zui小化交叉反應的可能性�？乖Q可以通過直接在表中編輯文本來定制。

請注意，即使工具有所指示，也可能無法獲得每個潛在的zui小交叉反應性排列。山羊和驢子通常是J佳的二抗體宿主物種選擇，因為它們具有zui小的交叉反應性。

標記來自同一宿主物種的初抗體

親和純化二抗體的單價Fab片段可覆蓋（阻斷）免疫球蛋白的表面，用于同一宿主物種的雙重標記一抗體，或阻斷組織切片或細胞表面的內源性免疫球蛋白。它們可以用于這些目的，因為Fab片段只有一個抗原結合位點（即它們是單價的）。

標記與樣本來自同一物種的初抗體

有時可能需要使用與樣本來自同一物種的初抗體，例如鼠對鼠。在這些情況下，二抗體也可能檢測到內源性免疫球蛋白，導致不必要的背景。這可以通過Fab片段阻斷來避免。

進一步考慮

出于一般阻斷目的，來自與二抗體宿主相同物種的正常血清（5%v/v）為非特異性、保守序列和/或Fc受體結合提供了有效的背景降低。

二抗體的單價Fab片段可以阻斷抗體的特定不良反應。這種阻斷適用于標本和初抗體屬于同一物種的情況（例如，小鼠貼上標簽），或在同一宿主動物中產生多個初抗體的情況。

可視化

成功的多重標記取決于探頭的使用，探頭的信號可以通過可用設備區分。

熒光顯微鏡是多重標記的通用平臺，因為濾波器組被設計用于區分可用的多種熒光團。窄帶通發射濾波器對于從多個熒光團中分離信號、抑制重疊光譜中的熒光檢測至關重要。當計劃多重標記協議時，用熒光團配制染料面板，其發射光譜分離良好，與可用儀器兼容。

Jackson ImmunoResearch注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務于大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml