Jackson公司Western印跡分六個階段進行：

1.樣品制備

2.通過凝膠電泳分離蛋白質

3.蛋白質轉移（電印跡）到膜上

4.膜阻塞

5.免疫檢測

6.可視化

蛋白質印跡可用于檢測天然和合成來源的蛋白質。來自表達系統的重組蛋白和來自生物樣品的內源蛋白都可以用蛋白質印跡法檢測。

對于要通過蛋白質印跡分析的蛋白質，必須先處理包含它們的樣品，以使目標蛋白質可用于分析。例如，在篩選表達時，通過裂解細胞提取蛋白質以釋放蛋白質，使其進入分離基質。

蛋白質提取之后可以進行變性和還原以將蛋白質轉化為其結構，這使得它們可以在電泳期間通過它們的分子量進行分離。

SDS-PAGE使用 SDS 包裹蛋白質，掩蓋其固有電荷并賦予與它們大小成正比的整體均勻電荷。

然后將樣品加載到凝膠中，并施加電壓。蛋白質向正J遷移。凝膠的密度阻礙了它們的遷移，使它們能夠按大小分開。分離后，通過將凝膠和膜直接接觸并施加電場將蛋白質拉入基質中，將蛋白質轉移（電印跡）到膜上。

蛋白質轉移之后是封閉步驟，該步驟使用蛋白質溶液來大限度地減少非特異性相互作用。然后將膜與特異性結合目標蛋白質的抗起孵育。

在進步的封閉步驟之后，偶聯的二抗與抗結合，從而使靶蛋白可視化。

比色或化學發光底物都可用于顯示來自報告酶偶聯物的信號。使用成像設備檢測來自熒光染料偶聯物的信號，并可用于同時檢測多個目標。

蛋白質印跡是種常規實驗室程序，可以檢測和分析許多蛋白質及其相互作用。蛋白質印跡的成功取決于抗體-抗原相互作用的特異性以及添加二抗的信號放大潛力。這些因素使蛋白質印跡J其敏感，能夠檢測低至皮克水平的蛋白質。根據試劑的種類和檢測方法的不同，可以獲得半定量和定量的結果。

蛋白質印跡可以高效可靠地進行，以產生高質量的印跡。本指南將幫助您選擇正確的試劑、選擇合適的抗體和檢測方法以及排除實驗故障。

Jackson公司樣品制備：

在電泳過程中準確分離蛋白質是蛋白質印跡的關鍵步驟。它依賴于正確處理的樣品，以便感興趣的蛋白質處于可以通過凝膠遷移的形式。

可以通過蛋白質印跡分析來自各種來源的蛋白質。樣品可能來自蛋白質表達系統，例如哺乳動物或細菌細胞培養物，或來自臨床組織樣品，每種樣品都需要不同的處理來產生終用途的優質蛋白質。這些蛋白質提取方法詳見表（1）；然而，對于蛋白質印跡，通常不需要如此嚴格地處理樣品。

由于免疫印跡的特異性，可以對用于蛋白質印跡的樣品進行粗略處理，以便提取蛋白質并將其轉移到適合將樣品引入分離凝膠進行電泳的溶液中。由于存在諸如 DNA 之類的聚合生物分子，粗樣品尤其可能是粘性的，并且可能會影響凝膠加載。

Jackson公司細菌培養的示例樣品制備過程：

取 1 ml 大腸桿菌培養樣品并轉移到冰上的微量離心管中。

在 4°C 下以 13,000 rpm 轉速旋轉 20 分鐘。

棄去上清液。

在 50 µl 上樣緩沖液中重懸細胞，并在 100°C 下煮沸 5 分鐘。

13,000 rpm 離心 5 分鐘。

加載。

Jackson公司貼壁細胞例如哺乳動物 (HEK293) 的示例樣品制備：

將組織培養板放在冰上，用冰冷的 PBS 清洗細胞。

吸出 PBS，然后加入適當體積的裂解緩沖液（例如 1 mL 每 107 個細胞/100 mm 培養皿 150 cm² 燒瓶；0.5 mL 每 5×106 個細胞/60 mm 培養皿/75 cm² 燒瓶）。

使用細胞刮刀從孔/燒瓶中分離細胞，然后用移液器吸頭或通過胰蛋白酶消化攪拌。

將細胞懸浮液轉移到預冷的微量離心管中。

然后在 4°C 下對樣品進行微量離心。條件取決于細胞類型，應根據您的實驗設置確定。例如，HEK 293 可以在 1000 rpm 下耐受 15 分鐘。

從沉淀的細胞中吸出上清液并轉移到冰上的新鮮試管中。

將負載染料添加到上清液中并在 100°C 下煮沸 5 分鐘。

細胞沉淀也可能與上清液起加載了染料。

將樣品以 13,000 rpm 的速度旋轉 5 分鐘，然后加載到凝膠中進行電泳。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務域覆蓋各大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml