顯色底物用于比色檢測。它們簡單易用。適用于大多數免疫技術——從免疫組織化學到蛋白質印跡和 ELISA，它們提供了種J具成本效益的檢測方法。

這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：Western Blot、IHC 和 ELISA 的顯色檢測。

顯色底物可用于許多免疫組織化學應用，從 IHC 染色組織到蛋白質印跡。將顯色底物添加到先與酶偶聯抗體（通常是辣根過氧化物酶 (HRP) 或堿性磷酸酶 (AP)）孵育的印跡或組織中，將底物轉化為有色沉淀物。通過簡單地洗掉基板來阻止信號發展。沉淀物肉眼可見，在蛋白質印跡上，無需特殊設備即可檢測為彩色條帶。用于免疫組化 (IHC) 時，在正常光學顯微鏡下可以在組織上看到顯色沉淀。

圖 1：間接比色檢測。A. 報告酶偶聯二抗可檢測目的蛋白的抗。B. 將顯色底物添加到抗體-抗原復合物中。C. 報道酶偶聯物催化顯色底物轉化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見。

、Jackson：溶解度

顯色試劑可用于不同的報告酶、HRP、AP、GOD（葡萄糖氧化酶）和 β-Gal（β 半乳糖苷酶）�；挠胁煌念伾挽`敏度。根據測定，可以選擇可溶性或不溶性底物。

不溶于醇的色原適用于使用復染劑或封固劑的蛋白質印跡和 IHC�？扇苄匀玖细m合 ELISA 和基于板的測定。

二、Jackson公司：Western印跡和斑點印跡

當用于蛋白質印跡或斑點印跡時，顯色底物在膜上固定抗原抗體復合物的位置顯示為彩色條帶或斑點（圖 2 和 3）。印跡可以顯影，直到條帶的信號達到所需的強度，這允許良好的靈敏度水平，因為可以直接觀察印跡的發展，并且通過洗去底物立即停止反應。然后可以對顯影的膜進行成像或存儲以供后續使用。樣品濃度低（低抗原）的樣品可能需要延長顯影時間，這可能導致背景較高、條帶模糊。

三、Jackson公司：酶聯免疫吸附試驗

比色 ELISA 測量可溶性有色產品的光密度，該光密度通常與樣品中存在的分析物的量成正比，從而可以對分析物進行相對定量。與其他免疫技術樣，ELISA 需要優化時間和開發條件，以獲得準確且可重復的測定。（圖4）

四、Jackson公司：免疫組織化學

比色檢測對于組織和細胞的免疫染色來說是種非常靈敏的方法。不同的底物提供不同的靈敏度和顏色以幫助識別，多種抗原識別是可能的，因為顏色可以與種底物和另種底物區分開來。有許多復染劑可用，可用于增加對比度，使 IHC 染色看起來更強。圖 5 顯示了3,3＇ 二氨基聯苯胺（ DAB 染色）與細胞核的蘇木精復染的棕色。

五、Jackson公司：報告酶（與抗體偶聯）

J常見的偶聯報告酶是來自辣根植物Armoracia rusticana的辣根過氧化物酶 (HRP)和來自小牛腸的堿性磷酸酶 (AP)，盡管來自大腸桿菌的葡萄糖氧化酶 (GOD) 和 ß-D-半乳糖苷酶也可以使用。HRP 和 AP 都根據應用要求提供不同的優勢。HRP 是種 40 kDa 的小分子，通常以 4:1 的比例與抗體結合。它的小尺寸意味著良好的細胞內滲透性，并且不太可能引起抗原/抗體復合物的空間位阻。AP 稍大（86 kDa），可能會導致空間干擾，但底物轉化反應是線性的，這可能意味著檢測孵育時間可以延長，并且可能更敏感。AP 還消除了對具有高水平內源性過氧化物酶（HRP 中的個限制因素）的組織進行非特異性染色的可能性。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務域覆蓋各大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml