洗滌去除印跡上存在的未結合或聚集的蛋白質以及可能干擾靶分子檢測并有助于降低背景信號的未結合試劑�？梢酝ㄟ^提高信噪比來提高檢測靈敏度，從而更準確地分析目標蛋白質。我們的蛋白質印跡指南的第 7 部分詳細介紹了蛋白質印跡的洗滌步驟的實踐。

Jackson公司蛋白質印跡指南丨膜清洗概述：

·洗滌步驟程序

·選擇合適的洗滌緩沖液

·參考

、洗滌步驟程序 

1.洗滌通常在室溫下進行。

2.通過將膜置于完全浸沒膜的定體積的洗滌緩沖液中來洗滌印跡。例如，平均 10 cm² 的印跡需要 >40 ml 的洗滌緩沖液，我們通常使用 100 ml。

3.將膜在洗滌緩沖液中孵育 5-10 分鐘，并使用搖桿或平臺搖床或合適的印跡處理器不斷攪拌。

4.然后在每次試劑孵育之間重復洗滌過程。

二、選擇合適的洗滌緩沖液

1.磷酸鹽緩沖液 (PBS)

PBS 溶液的配方可能有所不同，但通過結合磷酸鈉和氯化鈉將溶液緩沖至 7.5 的 pH 值，可以接近生理條件。如果目標蛋白被磷酸化，或者要使用堿性磷酸酶 (AP) 偶聯物，則應避免使用 PBS，因為磷酸鹽會與磷酸化蛋白相互作用或淬滅 AP 活性，從而影響結果的可靠性。

2.Tris 緩沖鹽水 (TBS)

TBS 有時用作洗滌緩沖液以替代 PBS。它通常通過將 Tris Base 與 Tris HCL 和氯化鈉混合制成生理 pH 值約為 7.2 的溶液。

3.洗滌劑

加入去污劑如 Triton X-100、SDS 或 Tween-20™ 以防止未結合的蛋白質聚集。粘性復合物可以形成并與膜結合，造成背景 Tween-20™ 通常以溶液的 0.05% 至 0.1% v/v 使用。

高于 0.1% 的濃度會從膜上剝離靶蛋白以及與其結合的抗體，從而降低印跡的信號和準確性。

注意1：微生物生長會產生背景信號

洗滌緩沖液應在使用新鮮配制。

注意2：洗滌緩沖液中的封閉試劑

有時將封閉試劑添加到洗滌緩沖液中。我們建議僅使用緩沖溶液，不添加封閉蛋白，如奶粉或 BSA。

三、Jackson ImmunoResearch 蛋白質印跡指南丨膜清洗部分文獻參考：

Blancher C. et al. (2001). SDS-PAGE ａnd Western Blotting Techniques. Methods in Molecular Medicine. DOI: 10.1385/1-59259-136-1:145.

Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (2017). Western Blotting Troubleshooting Guide! https://www.jacksonimmuno.com/secondary-antibody-resource/technical-tips/western-blot-trouble-shooting/

GE Healthcare. (2011). Western Blotting Principles ａnd Methods.

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務域覆蓋各大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml