艾美捷Abbexa 質粒 MiniPrep 試劑盒套件內容：

零件 50 次 200 次

重懸緩沖液 (RB) 15 毫升 60 毫升

裂解緩沖液 (LB) 15 毫升 60 毫升

中和緩沖液 (RB) 20 毫升 80 毫升

洗滌緩沖液 (WB) 10 毫升 2 × 20 毫升

洗脫緩沖液 (EB) 5毫升 10 毫升

核糖核酸酶 A (10 毫克/毫升) 150 微升 600 微升

帶收集管的小型質粒離心柱 50 2×100

艾美捷Abbexa 質粒 MiniPrep 試劑盒檢測程序：

1、通過將整個 RNase 小瓶添加到重懸緩沖液瓶中來制備工作重懸緩沖液。充分混合并儲存在 2-8 °C 之間。

2、通過向每個洗滌緩沖液瓶中加入 100% 乙醇來制備工作洗滌緩沖液：40 ml (50 rxns)；或 2 × 80 ml (200 rxns)。攪拌均勻。

3、將過夜培養的細菌懸浮液添加到微量離心管中。測量 LB 培養基體積并記下下表中所需的試劑體積。

LB培養基 工作重懸緩沖液  裂解緩沖液  中和緩沖液

≤ 5 毫升 250 微升 250 微升 350 微升

5-10毫升 500 微升 500 微升 700 微升

10-15 毫升  750 微升  750 微升  1050 微升

15-50 毫升  1000 微升  1000 微升  1400 微升

4、以 10,000 × g 離心 1 分鐘。棄去上清液。

5、根據上表，將適量的工作重懸緩沖液（與 RNase A 預混合）添加到細胞沉淀中，并通過移液器將其完全重懸。

6、根據上表添加適量的裂解緩沖液（藍色液體）。將試管倒置 4-6 次，立即徹底混合。裂解液應從不透明變為亮藍色。

7、在完成第 6 步后的 5 分鐘內，根據上表添加適量的中和緩沖液（黃色液體）。通過顛倒試管 4-6 次徹底混合。中和完成后，裂解液將變為黃色，并形成淡黃色沉淀。讓裂解物在室溫下靜置 2 分鐘。

8、以 12,000 × g 離心 5 分鐘。將上清液轉移到離心柱中。

9、以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過。

10、向柱中加入 650 µl 工作洗滌緩沖液（加乙醇），然后以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過。

11、將空柱以 12,000 × g 離心 1-2 分鐘，以完全去除任何殘留的洗滌緩沖液。

12、將離心柱放入干凈的微量離心管中，然后將 30-100 µl 洗脫緩沖液或無菌蒸餾水 (pH > 7.0) 直接添加到柱基質的中心。為獲得更高的產量，請將洗脫緩沖液或水預熱至 65 °C）。讓色譜柱在室溫下靜置 1 分鐘。以 10,000 × g 離心柱 1 分鐘以洗脫 DNA。分離的質粒 DNA 可以立即使用，也可以儲存在-20°C。

注：

1、在室溫下進行所有離心步驟。

2、使用，請檢查 Lysis Buffer 溶液是否混濁。如果渾濁，將瓶子在設置為 37 °C 的水浴中加熱，以確保所有內容物都完全溶解。使用后立即擰緊瓶蓋以避免 pH 值變化。

3、該試劑盒的zui 大 DNA 產量為 40 µg。如果質粒 DNA 產量低，增加細菌培養量。

4、使用上述建議的工作重懸緩沖液、裂解緩沖液和中和緩沖液的體積，因為過多的細胞培養會導致不完全裂解，從而影響質粒 DNA 的產量和純度。

5、5 ml LB 培養基相當于 1 次 rxn。

Abbexa研究涵蓋抗、二抗、蛋白質、ELISA試劑盒、酶以及其他用于研究的試劑盒和工具。無論是進行學術研究，藥物開發，疾病研究還是其它生物學研究，Abbexa的單克隆抗體，多克隆抗體，蛋白質和生物試劑均旨在促進科研工作者的研究。艾美捷科技是Abbexa的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Abbexa.shtml