基本克隆實驗流程：取得更高效率的三個步驟

1.確定入門克隆

入門克隆 是您進行實驗的方式和地點，因為它包含你的目的基因或 attL 序列插入的 DNA 片段，然后將其與 attR 序列重組以創建所需的表達克隆。選擇一種我們的TOPO 克隆載體來構建您的入門克隆，或從經過驗證的 Ultimate ORF 克隆庫中購買預制克隆。

2.用克隆酶介導反應

一旦準備好入門克隆，就可以將目標基因輕松地導入第二個質粒，即目標載體。該反應由 LR Clonase 酶混合物介導，利用蛋白機制從入門克隆中切除目的基因，整合至目標載體中，然后用作您的表達克隆。其逆反應很簡單：利用 BP Clonase 酶混合物進行 BP 反應（attB 和 atPP 位點之間的重組）。LR Clonase和 BP Clonase 酶混合物均采用易于使用的預混液形式，確保了反應之間的一致性和可靠性。

3.選擇目標載體

將目的基因或 DNA 片段克隆到 Gateway 載體后，您可以根據需要將其導入多個目標載體中。

從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物細胞中的蛋白表達到 RNAi 研究，從晶體學到蛋白與蛋白互作的功能研究，總有一種目標載體適合您的應用。對于需要特殊或定制載體的應用領域，Gateway 載體轉換系統可以將任何載體轉換為與 Gateway 克隆兼容的載體。

GeneCopoeia提供的 EZShuttle™重組克隆體系應用E.coli和λ噬菌體特異位點的重組酶促體系使 DNA丨片段在載體間相互轉換，其原理與 Gateway克隆技術相同。

BP反應-構建入門載體：

通過PCR將attB位點添加到目的DAN序列兩側，形成attB-PCR產物。用attB-PCR產物或者含attB位點的供體質粒和含attP位點的質粒發生重組生成入門克隆。

LR反應-構建表達載體：

制作表達載體時，選擇適合的目標載體非常重要。這種選擇取決于許多因素，如宿主類型，所需的表達水平和實驗目的。選定的attR表達載體與attL-入門載體重組以產生表達載體。

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商優保持著密切的合作關系，目前已成為眾多知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短時間內為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品及物流服務。 

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