ELISA 檢測的目的是為實驗提供準確可靠的定量分析實驗依據。為了保證實驗數據的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面質量控制和全過程質量控制。在收集標本前都必須有一個完整的計劃。齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490

注意事項：

◆   每個標本量收集體積＝  100ul × 檢測種類，如要做復孔，標本量收集體積＝  100ul × 檢測種類×2 。

◆   對于作某一個具體指標來說，先用一系列稀釋度作一批標本測定，得出對實驗有意義的一個稀釋度（即測定劑量反應曲線），然后用一個*適稀釋度測定即可。

◆   收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃ 或-70℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存48 小時.-20℃ 可保存1個月。 -70 度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

◆   血清標本采集時，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以 HRP為標記的 ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。

【人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠHLAⅠ）ELISA試劑盒】◆   為了保證尿液檢測結果的準確性，必須正確收集尿液標本和保存。盛尿容器要清潔干燥。使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染，影響檢測結果。尿液標本必須新鮮，留取后，應及時檢測或保存，以免細菌繁殖。因在室溫中久置后（尤其是夏季）尿中磷酸鹽等可析出結晶而干擾檢測。

◆    標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性 HRP，也會產生假陽性反應。保存過久可發生聚合在 ELISA中可使本底加深。

◆   凍結標本融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。

◆   混濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。

◆   反復凍融會使蛋白效價降低，所以待測標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。也可加入適當防腐劑。

◆   如果您在實驗中遇到任何特殊問題，敬請咨詢 021-60348496標本類型

ELISA常見的標本一般包括：

◆   液體類標本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

◆   培養細胞

◆   組織標本

這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。

【人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠHLAⅠ）ELISA試劑盒】標本的保存

一般說來，在 5 天內測定的標本可放置于 4℃，超過一周測定的需低溫凍存。

對收集后當天進行檢測的標本，儲存在  4 ℃ 備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在  -20 ℃ 或  -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。 標本  2 -8 ℃ 可保存  48 小時，-20 ℃ 可保存  1 個月。-70 度可保存  6 個月。部分標本也可加入適當防腐劑，激素類標本需添加抑肽酶。標本的處理 可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、細胞培養上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定，有些則需經預處理。

◆ 血清：  

室溫血液自然凝固  10-20 分鐘后，離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。  

◆ 血漿：  

應根據試劑盒的要求選擇  EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入  10 ％（  v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或  1% heparin 或  2.0%EDTA.Na2) 混合  10-20 分鐘后，離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清如有沉淀形 成，應再次離心。  

【人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠHLAⅠ）ELISA試劑盒】◆ 尿液、胸腹水、腦脊液：  

用無菌管收集。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。  

◆ 細胞培養上清：  

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時，用  PBS （  PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到  100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。  

◆ 細胞：

檢測細胞的成份時，對于貼壁細胞，去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上

清，即可進行后續操作。

【人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠHLAⅠ）ELISA試劑盒】◆ 組織標本：  

切割標本后，稱取重量。加入一定量的  PBS或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清置于  -20 度或  - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490  

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