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VEB-3型與VEB-1型超廣譜β-內酰胺酶生化特性
點擊次數:1013 發布時間:2007/1/26 15:23:16
目的 研究VEB-3型超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)的生化特性,并與VEB-1型ESBL進行比較。方法 將blaVEB-3和blaVEB-1基因連接至pET28a載體上,并用重組質粒轉化大腸埃希菌BL21進行克隆表達,分別挑選blaVEB-3或blaVEB-1陽性表達的菌落測定β-內酰胺類抗生素對其抑菌濃度(MIC),同時提取酶蛋白進行等電點和酶動力學分析。 結果 VEB-3和VEB-1型ESBL具有基本一致MIC和相同的等電點(pI 7.45),但兩者的酶動力學性質存在一定的差異:對頭孢他啶和頭孢噻肟,VEB-3較VEB-1表現出更高的親和力,兩者Km相差一倍左右;對頭孢噻吩,VEB-1比VEB-3更具親和力;而對阿莫西林,VEB-1型ESBL表現出很高的親和力,而VEB-3僅有低的親和力,兩者Km相差20多倍。 結論 VEB-3和VEB-1型ESBL具有相同的等電點,不同的動力學參數,blaVEB-1基因中Leu56 →Phe突變可能導致了兩者酶動力學性質的差異
原創作者:上海光譜儀器有限公司