1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數倍。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4. 配液：將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3�！　�8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

　　【計算結果】：

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

　　【注意事項】：

　　1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染�！　�6.底物請避光保存�！　�7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�！　�9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　小鼠肝細胞生長因子ELISA試劑盒產品來源：

　　http://www.hualanchem.net/Products-37390956.html

　　https://www.chem17.com/st201489/product_37390956.html

原創作者：上海羽泉泵閥制造有限公司