抗體捕捉ELISA

本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷�？贵w捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為：

① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干

③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

斑點ELISA

與常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：

⑴載體膜的預處理及抗原包被　取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。

⑵ 封閉　將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。

⑶ 加被檢血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。

⑷ 加酶標抗體，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。

⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。

⑹ 結果判定　以陽性、陰險血清作為對照，膜片中央出現深棕紅色斑點者為陽性反應，否則為陰性反應。

布ELISA

（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為反應提供較大的表面積，提高反應的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序為：

⑴ 把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經洗滌及封閉；

⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；

⑶ 加酶標記的抗布氏桿菌抗體，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；

⑷ 加入底物液顯色；

⑸ 測定OD值。

雞CCAAT增強子結合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒 

影響因素編輯 播報

酶聯(ELISA)是如檢驗科常用的學檢測方法，其操作簡單，無須特殊設備，使其在各醫院都有應用。但是，如果忽視了影響其結果的因素，難免會造成假陰性或假陽性，因此，了解影響實驗的因素，減少差錯事故的發生是其必要的。

素質因素

實驗室人員的素質主要包括五個方面：思想素質、文化素質、技術素質、心理素質、身體素質。應具備一個良好的思想素質，因為我們的服務對象是人，我們的道德水平直接關系到人們的健康和生命安危，如果馬馬虎虎。三心二意，難免會有差錯事故發生，我們應該熱愛，耐心細致。在工作中如標本混淆、張冠李戴、報告單發錯等都有可能造成嚴重后果；其次文化素質和技術素質，我們要熟練掌握本的基本理論和基本技術，認真學習新理論新知識，努力提高自己的業務水平，創造一個能夠勝任本職工作的技術平臺。良好的心理素質就是要勇于面對工作生活中的挫折，在繁忙工作中，有條不紊，冷靜沉著的處理有關事務。人員素質問題是影響檢驗結果的要因素。

標本處理因素

實驗室人員收到標本后應認真查對，對不符合要求的標本和申請單要拘收，合格標本要及時分離血清，避免溶血，提取血清時不應混有大量纖維蛋白或細胞成分。對不能及時檢測的標本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始記錄，標本管上好標上待檢者姓名、日期。從冰箱取出的標本要預溫至室溫，對冰凍的樣品要融化好，并充分混勻再用。

注意事項編輯 播報

1、操作應對實驗的物理參數有充分的了解，如環境溫度(保持在18 C～25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

2、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結果錯誤，實驗重復性差。

3、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數，洗液在反應孔內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。

4、要加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。

5、顯色液量不可過多 加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。

6、試劑的影響因數：應選用有國家批準文號，質量靠得住的產品，不能圖便宜，忽視質量。試劑應妥善保存于4℃冰箱內，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內用完，剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導致錯誤結果。過期的試劑不宜再用，若別無選擇，應做好雙份質控品的監測，確保結果的可靠性。

二、ELISA的類型ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：①固相的抗原或抗體，即“吸附劑”（immunosorbent） ;②酶標記的抗原或抗體，稱為“結合物（conjugate）;③酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。