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下面說下ELISA實驗常遇到的問題以及解決方案。
異常
結果描述
【白板】
顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。
原因分析
1.試劑已過效期,或不同試劑盒組分混用
2.錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B
3.洗板及加樣過程中,酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力
4.終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配置
5.蒸餾水有問題
對策
1.檢查試劑的組分及批號,確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用
2.嚴格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現象
3.確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈
4.每次配制時都應看清標簽標明物質
5.確認配制洗液的純化水達到要求且未污染,與好蒸餾水比較
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯免疫試劑盒
顯色弱、靈敏度 低
實驗結束后,包括陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。
1.試劑盒超過期, 超過有效期的產品可能會產生很弱的信號; 試劑盒沒有按規定進行保存,受高溫影響
2.試劑、樣品用未平衡至室溫
3.加入試劑的體積和時間有誤, 移 液器計量不準,吸嘴內水分太多或不清潔
4.洗板及加樣過程中,酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力
5.孵育時間及孵育溫度未達到要求 ,反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整
6.洗板次數過多,或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長
7.顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入
8.底物作用時間不夠
9.蒸餾水水質有問題
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯免疫試劑盒
對策:
對策:
1.實驗檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過期。 不要將試劑盒長時間置于常溫下,按使用規定儲藏。
2.從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應置室溫平衡 20分鐘左右。
3.確定所使用的試劑體積正確,加入時間適當。 校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應完全
4.確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈,確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染
5.孵育溫度應控制在 37-38℃,孵育時間嚴格按照說明書操作。 保溫期內不宜多開門,以免影響保溫
6.嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數
7.顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑?A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
8.準確定時
9.測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
實驗結束后陰陽性對照正常,質控正常,但臨床標本感覺顯色較弱
1.待測標本中可能不含強陽性標本,故結果可能是正常的
2.標本加入疊氮鈉作為防腐劑
對策
1.如有懷疑,可復檢
2.酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯免疫試劑盒
陰陽性對照正常,但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出
1.未達要求的孵育溫度及孵育時間 可檢出強陽性標本,但 質控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出
2.質控品或標本高溫放置過久,或被反復凍融致待測物滴度下降,而未能檢出
3.儀器設定不正確,濾光片不匹配
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