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推薦：Ec Uracil DNA glycosylase(UDG)說明書
E. coli Uracil N-Glycosylase (UNG)，即大腸桿菌UDG或UNG，可催化含尿嘧啶的DNA鏈中的尿嘧啶(dU)堿基和脫氧核糖之間的N-糖苷鍵發生水解，從而釋放游離尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的單鏈或雙鏈DNA，但不能水解RNA或含有dU的長度不超過6個堿基DNA寡聚體。
UDG主要應用于消除PCR擴增過程中帶來的產物污染問題。其防止污染的原理為：在PCR反應中加入適量的dUTP，以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成含dU堿基的PCR擴增產物；后續進行PCR反應時，使用UDG酶選擇性切割可能被污染而帶入的之PCR擴增產生的含有dU的單鏈或雙鏈DNA，從而避免之的PCR擴增產物可能的污染對于本次PCR擴增帶來的負面影響。
活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60 pmol of uracil per minute from double-stranded, uracilcontaining DNA. Activity is measured by release of [3H]-uracil in a 50 μl reaction containing 0.2 μg DNA (104–105 cpm/μg) in 30 minutes at 37℃.
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來源：大腸桿菌重組、表達和純化而獲得。
純度：不含UDG酶活力之外的內切或外切脫氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。
用途：防止PCR產物的交叉污染；單核苷酸多態性檢測(single nucleotide polymorphism detection，GMPD)；位點特異性突變；蛋白質與DNA相互作用研究；SNP基因分型；PCR產物的克��；制備含有單鏈突出末端的PCR產物或cDNA。
酶儲存溶液：10mM Tris-HCl (pH 7.4), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 50% (v/v) glycerol。
10X E. coli UDG Buffer：200mM Tris-HCl, 10mM EDTA, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。
失活或抑制：95℃加熱10分鐘可以使95% E. coli UDG失活。由于經95℃加熱10分鐘處理后，其仍保持部分活性，建議加入UDG抑制劑(如來自枯草芽孢桿菌噬菌體PBS2的Ugi蛋白或噬菌體phi29的p56蛋白)進一步抑制其酶活以免其繼續降解含有dU的PCR產物。
保存條件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事項：E. coli UDG酶在大多數PCR反應緩沖液體系中均有活性，但對于自行使用的PCR或RT-PCR體系， 使用時建議先測試一下是否和所使用的體系兼容。通常取含dUTP的PCR擴增產物，參考圖1加入適量UDG，觀察能否有效降解含dUTP的PCR擴增產物。
E. coli UDG酶消化產生的DNA鏈的無堿基位點可通過加熱，堿處理或核酸內切核酸酶處理而除去。通常PCR反應過程中的加熱步驟可以確保UDG酶消化的位點被完全剪切開。
E. coli UDG酶在比較寬泛的pH范圍內具有活性，其適pH值為8.0，E. coli UDG酶活不需要二價陽離子，并被高離子強度(> 200 mM)所抑制。
E. coli UDG酶可以在PCR反應清除不慎污染的含dUTP的PCR產物，從而避免由于污染導致的PCR假陽性結果。
E. coli UDG在加熱變性后可能由于重折疊而在較低溫度下表現出殘留活性。因此，建議在退火步驟中使用55℃或更高的溫度進行后續PCR。
E. coli UDG可以用于DNA或cDNA的常規PCR或qPCR擴增體系，但通常不建議用于RT-PCR體系。因為在反轉錄條件下，通常E. coli UDG會保持活性，并可能消化新合成的cDNA。
E. coli UDG酶經95℃加熱10min處理后，仍會保持少量活性，如果希望用于RT-PCR體系，需要反轉錄和PCR分開進行，在反轉錄時不使用dUTP，在反轉錄后加入E. coli UDG酶處理，然后進行常規的PCR或qPCR，或者建議加入UDG抑制劑(如來自枯草芽孢桿菌噬菌體PBS2的Ugi蛋白或噬菌體phi29的p56蛋白)進一步抑制E. coli UDG的酶活性。
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原創作者：上海篤瑪生物科技有限公司
