酶聯吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或與酶的結合，形成酶標抗原或，保持其活性，同時又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標記抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在測定時，把受檢標本(含待測或抗原)和酶標抗原或按一定程序與結合在固相載體表面的抗原或起反應形成固相化抗原-酶復合物，用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復合物與其它成分分離，結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的量成一定的比例，加入酶反應的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產物，通過定性或定量檢測有色產物的量即可確定樣品中待測的含量。

ELISA測定結果如何計算.ELISA測定結果計算如下：1.計算陰性對照A值的平均數(NCX )和陽性對照A值的平均數(PCX)。2.兩個平均數的差(P-N)大于一個特定的數值，例如0.400，試驗才有效。3.3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。5.標本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。需要注意的是，試劑盒的常數只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

ELISA試劑盒用法

雙夾心 本法主要用于檢測大分子抗原�，F以檢測雞傳染性法氏囊�。↖BDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。 ① 加包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加酶標 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 ④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液 ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 雙夾心ELISA 此法與雙夾心ELISA的主要區別在于：它是采用酶標抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種，還可試驗的性。此法的基本程序為： ① 加（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加用非同種動物生產的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ④ 加入酶標抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 ⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。 競爭ELISA 此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射測定。其基本程序為： ① 包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 ④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

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