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豚鼠白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒
豚鼠白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒
實驗原理ELISA運用了學原理和化學反應顯色原理,需要將抗原或預包被在固相載體表面,使后來形成的抗原--酶 (熒光基團) -底物復合物黏附在載體上,通過檢測OD值或發光值,來檢測靶蛋白的含量。
ELISA試劑盒基于抗原之間的特異結合反應,以用于測定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動物后的多克隆和使用雜交瘤技術的單克隆,而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成制備。ELISA試劑盒的作用ELISA試劑盒是一種用于體外定性檢測人或中的特定的試劑盒,例如抗人類戊型(HEV)IgMELISA檢劑盒。ELISA試劑盒具有靈敏度高、特好、操作簡便、安全、快速等優點,可以用于檢測類因子、、等,在臨床診斷、科研和生物制品檢測等域具有廣泛的應用。
90分鐘一步法ELISA試劑盒可以適用于、、組織勻漿、細胞上清液等樣本類型。這些樣本可以用于檢測、和其他微生物等病原體,以及、自身性等病理情況。同時,ELISA試劑盒還可以用于檢測濃度、維生素等營養,以及污染物等有害的殘留量。需要注意的是,不同樣本類型和檢測項目可能對ELISA試劑盒的靈敏度和特產生影響,因此在選擇使用ELISA試劑盒時需要根據具體情況進行選擇。
酶聯吸附法(ELISA)的原理是利用抗原或與酶的結合,形成酶標抗原或,保持其活性,同時又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標記抗原或,它既保留了活性,又保留了酶的活性;在測定時,把受檢標本(含待測或抗原)和酶標抗原或按一定程序與結合在固相載體表面的抗原或起反應形成固相化抗原-酶復合物,用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復合物與其它成分分離,結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的量成一定的比例,加入酶反應的底物后,底物被固相載體上的酶催化生為有色產物,通過定性或定量檢測有色產物的量即可確定樣品中待測的含量。
ELISA試劑盒的操作步驟如下:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml,酶標板中每孔加入50μl,室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌:棄包被液(拍干,再用無塵紙吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次(每孔均要加滿),每次3min~5min。3.封閉:每孔加封閉液(1%BSA)250μl,37℃封閉2h。4.洗滌:用1×PBST洗滌液洗板3次,每次3min~5min。5.結合一抗:用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢,每孔100μl,要設立陰性對照,37℃孵育1.5h。6.洗滌:同上。7.結合酶標二抗:每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀釋倍數根據產品不同有所不同,可按說明書進行)50μl,37℃孵育1h.8.洗滌:同上。9.顯色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室溫避光顯色10min。10.待顯色后,每孔加入50μl終止液(2mol/L H2SO4)終止反應。使用酶標儀讀取450nm的OD值,以確定水平。以上步驟僅供參考,具體操作請根據實際情況和產品說明書進行。
操作步驟
1. 工作:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘,使試劑盒恢復至室溫。同時好實驗所需的材料和。2. 加樣:在酶標板的弟1個孔中加入品50μL,然后在后續的孔中依次加入待測樣本50μL。3. 溫育:將酶標板密封,在37℃下溫育30分鐘。4. 洗滌:用洗滌液清洗酶標板,共洗滌5次。每次洗滌后,用吸水紙輕輕吸干孔內。5. 加酶:在每個孔中加入酶標物100μL。6. 溫育:再次將酶標板密封,在37℃下溫育30分鐘。7. 洗滌:用洗滌液清洗酶標板,共洗滌5次。每次洗滌后,用吸水紙輕輕吸干孔內。8. 加底物:在每個孔中加入底物A液50μL,再加入底物B液50μL。9. 終止反應:在每個孔中加入終止液50μL。10. 檢測:用酶標儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度(OD值)。
豚鼠白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒
結果分析
根據品和樣本的OD值,繪制曲線,從而計算出樣本中角蛋白1(KRT1)的濃度。具體分析可參劑盒說明書或相關文獻。
注意事項
1. 在操作中,應保持酶標板的干燥,避免水分進入孔內。2. 加樣時需確保加樣準確、無氣泡產生。3. 溫育和洗滌中需嚴格控制時間和溫度,確保實驗結果的準確性。4. 在使用酶標儀讀取OD值時,需確保波長設置正確,避免誤差產生。5. 在整個實驗中,需保持操作的清潔和整潔,避免交叉污染。
原創作者:上海篤瑪生物科技有限公司