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兔血小板球蛋白β(βTG/PBP/CXCL7/NAP2)ELISA試劑盒
兔血小板球蛋白β(βTG/PBP/CXCL7/NAP2)ELISA試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的白蛋白（ALB）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
自從Engvall和Perlman(1971）報道建立酶聯吸附試驗（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以來，由于ELISA具有快速、、簡便、易于化等優點，使其迅速的發展和廣泛應用。盡管早期的ELISA由于特不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐，但隨著的不斷改進、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程制備包被抗原，采用針對某一抗原表位的單克隆進行ELISA試驗，都大大了ELISA的特，加之電腦化程度的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實用和化，從而使其成為廣泛應用的檢測。如ELISA已被廣泛應用于多種和等的診斷。在動物檢疫方面，ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的。
試劑盒組成：自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱
樣品收集、處理及保存
1. ：使用不含熱原和內的試管，操作中避免任何細胞，收集血液后，3000轉離心10分鐘將和紅細胞迅速小心地分離。
2. ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
辣根過氧化物酶：過氧化物酶（HRP）廣泛分布于植物中，辣根中含，從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶（HRP），是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構成的一種糖蛋白（含糖量18%），分子量約40 000，約由300個酸組成，等電點為pH 3-9，催化反應的適pH值因供氫體不同而稍有差異，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的銨溶液。酶蛋白和輔基吸收光譜分別為275nm和403nm。
兔血小板球蛋白β(βTG/PBP/CXCL7/NAP2)ELISA試劑盒
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正�，F象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0的S0號品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有組分使用充分搖勻。
試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
| 品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注：品（S0-S5）濃度依次為：0、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL
試劑的
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板
1. 手工洗板：甩盡孔內，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置品孔和樣本孔，品孔各加不同濃度的品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
ELISA：本法主要用于檢測型特。該現已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測。下面以AP2型的ELISA檢測法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 用200μl緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。本試驗同時設陰、陽性對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。
試劑盒性能
1. 準確性：品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度檢測濃度小于1.0 mg/mL。
3. 特：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
原創作者：上海篤瑪生物科技有限公司
