ELISA的發展史:

3√ ELISA試劑盒它使我們對以一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據試劑盒內說明書進行實驗操作,網站電子版說明書僅作參考。

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ELISA實驗步驟及注意事項

1、固相載體選擇

聚苯乙烯:具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。

聚氯乙烯:聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。

2、包被

①板孔的選擇:ELISA別的微孔板。

②抗體選擇:選擇支持ELISA實驗的抗體,根據推薦濃度稀釋或摸索適濃度。

③包被緩沖液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。

④包被溫度:2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h。

⑤包被濃度:包被濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。

3、封閉

①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)。

②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養BSA、Tween等)。

4、加樣及孵育

①加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。

②孵育的時間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件,建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉速在500±50rpm。

③檢測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據說明書提示。

④洗板對于ELISA來說,是其關鍵的一步,保證ELISA的特異性。

⑤封板膜一定要一次一換,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。

5、顯色和終止

①使用需檢查,底物在加入96孔板之應為無色透明。

②顯色底物需現配現用,避免污染。

③孵育時間,說明書上為參考范圍,具體需要根據實驗條件自行摸索�？蓞⒖紭饲鷿舛� 孔的顏色,變為藍色較明顯時即可。

實驗器材使用小技巧

1、塞瓶口時消毒,右手拇指、食指塞進膠皮內,將塞旋入消毒瓶口內,瓶口再消毒瓶直           立火焰方,雙手拇指、中指固定瓶位,雙手食指將膠皮外翻,后用消毒紙包裝

3、瓶管、蓋的使用要求同塞,需使用同一蓋使用面放在酒精棉球上,套蓋,蓋使用面                    火焰消毒

化學實驗室守則:
1. 實驗室要保持安靜,嚴禁大聲喧嘩、吵鬧。
2. 在實驗,要預先作好實驗準備,進入實驗室時,要有秩序,按規定的座位就座。
3. 實驗,必須了解清楚實驗內容、目的、要求和實驗步驟。
4. 實驗開始時,應先查點儀器、產品是否齊全,不得隨意調換,如發現問題,及時報告。
5. 實驗必須按步驟進行,并仔細觀察,做好記錄,實驗后后及時寫好實驗報告。
6. 實驗時,要愛護儀器,節省產品,由于違反操作規程而損壞丟失的儀器,必須賠償。
7. 實驗結束,要將儀器整理或清洗,保持桌面,室內的整潔后才能離開。

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