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技術文章
推薦：牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒@2023已更新
點擊次數：21 發布時間：2023/12/26 13:17:46
推薦：牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒@2023已更新
檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
推薦：牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒@2023已更新
推薦：牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒@2023已更新
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正�，F象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為 0 的標準品可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍，終結果乘以5才是樣本終濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用充分搖勻。
6. 若中英文說明書有誤，請以中文說明書為準。
7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
試劑盒組成
名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無
標準品 0.5mL 0.5mL 按說明書進行稀釋
標準品稀釋液 6mL 3mL 按說明書進行稀釋
樣本稀釋液 6mL 3mL 按說明書進行稀釋
檢測抗體-HRP 6mL 3mL 無
20×洗滌緩沖液 20mL 20mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
操作步驟
1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4. 隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 50μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗 板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
免責聲明
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。
嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。
用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
此套件的交貨時間為2-3天。
*保存溫度：2 - 8 C。
*保質期：6個月。
*國內快遞.
凡在本公司購買ELISA試劑盒，可提供免費待測服務，視樣本數量而定出結果時間，一般一周內出檢測結果！
原創作者：上海篤瑪生物科技有限公司
