【原理】

ELISA雙抗體夾心法（enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique）的原理是將特異性抗體結合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢血清中的相應抗原結合形成復合物，洗滌后再加酶標記抗體，與復合物中抗原結合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物，加底物顯色，判斷抗原含量。

綿羊雙腎上腺皮質激素(DCX)ELISA試劑盒

操作步驟：

實驗開始，請提配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔�？瞻卓准訕悠废♂屢�100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用小時內配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

免責聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。

嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

原創作者：上海篤瑪生物科技有限公司