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推薦：兔B細胞分化因子(BCDF) ELISA 試劑盒@2023已更新推薦
點擊次數：34 發布時間：2023/12/22 12:42:13
兔B細胞分化因子(BCDF) ELISA 試劑盒
選擇一款合適的酶標板，是ELISA實驗成功的步，然而很多人卻忽略了這一點。大家在做實驗時往往只考慮實驗本身，卻不知道產品往往對實驗也有很大影響。合適的選擇產品，將有助于實驗的成功進行。我們在進行ELISA實驗的時候通�？�慮以下這些因素:
一:孔底的形狀:
現在的廠家均將酶標孔設計成立的柱狀，適當地增大孔與孔之間的距離，使之能立分開，從而程度地減少交叉污染。不同種類的酶標板其孔底的形狀是不同的。以下是一些常見孔底形狀:
平底:底部水平，也叫F底。光透過底部不會發生偏折，可以程度的透光。應用于因可視性或其他原理需要用到圓底的實驗。
圓底:也叫U底，提供的清洗效果以及混合型能，適合需要測試沉淀物的應用。
C型底:介于平底和圓底之間能夠提供好的清洗效果，同時結合了平底的優點。
錐型底:又稱V底，適用于取樣以及儲存微量樣本，以獲得小容量的回收。
二:酶標板的顏色:
酶標板的顏色有三種:透明、黑色、白色。絕大多數ELISA都選擇透明板作為實驗材料。白色和黑色的酶標板一般用于發光檢測。黑色的酶標板自身會有光吸收，所以其信號要弱于白色的酶標板。黑色的酶標板一般用于檢測較強的光，如熒光檢測;相反，白色的酶標板可用于較弱的光檢測，常用于一般的化學發光和底物顯色(如雙熒光素酶報告基因分析)。
三:酶標板的材質:
常見的材質有聚乙烯(polyethylene,PE)，聚丙烯(polypropylene,PP)，聚苯乙烯(Polystyrene,PS)，聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸(Polycarbonate,PC)。ELSIA中應用廣的是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯質軟板薄，可剪割，價格低廉。缺點是光潔度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相應的背景值也會有所增加。通常要在酶標板表面進行離子接枝處理，在聚合物表面引入醛基、氨基、環氧基等活性官能團，提高基體表面的性能。
四:不同的結合機理:
包被物質與板底表面的有效結合是ELISA中至關重要的一步。因此，在實驗開始應仔細分析待包被物質的結構特點與化學特性，以選擇適當的酶標板。一般來說，包被物質與板底有以下幾種結合方式:被動吸附、共價結合和親和捕獲。被動吸附(Passive Adsorption):被動吸附的機理比較復雜，包被物質與板底之間的結合主要依靠分子間作用力(范德華力)和氫鍵。在絕大多數ELISA中，包被物質與板底的結合都是依靠被動吸附來完成的。一般來說，中等分子量及大分子量的抗原(或抗體)與板底之間的結合是依靠被動吸附來完成的。在挑選酶標板時通常要考慮板底表面的疏水性/親水性特征。下表中列出了不同親水性的板底表面的適用范圍及用途:
基本步驟
1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。
2)封閉:孔內加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋
白質結合。
3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標抗原或抗體的樣本。
4)洗滌:去除未結合的物質。
5)檢測抗體添加:加入對特定抗原有特異性的酶標記檢測抗體。
6) 再次洗滌:再次去除未結合的檢測抗體。
7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產生顏色變化。
8)終止反應:加入終止溶液停止酶的反應(在某些類型的ELISA中需要)。
9) 讀數:使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度
與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。
試劑盒性能：
1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 靈敏度：檢測濃度小于0.78 nmol/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
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原創作者：上海篤瑪生物科技有限公司
