兔血栓調節蛋白(TM) ELISA 試劑盒

實驗原理

 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

 操作步驟

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；

3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 50μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗 板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

結果分析

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用業的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。 

注意事項

1. 試劑盒的質量：選擇正規廠家生產的試劑盒，確保試劑盒的質量和穩定性。

2. 嚴格控制實驗條件：實驗過程中要嚴格控制溫度、pH值、離子強度等條件，以實驗結果的準確性。

3. 避免交叉污染：實驗過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標準化操作：實驗操作要標準化，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，避免人為誤差對實驗結果的影響。

5. 定期校準：定期對實驗儀器進行校準，確保儀器的準確性和穩定性。

6. 保存好實驗數據：實驗過程中要保存好實驗數據，以便后續分析和處理。