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新消息:兔甲狀腺過氧化物酶(TPO) ELISA 試劑盒@2023動態已更新
兔甲狀腺過氧化物酶(TPO) ELISA 試劑盒
實驗原理
1. 抗原抗體反應
ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上,當加入待測樣本時,樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發生反應,形成抗原抗體復合物。
2. 酶標記物的結合
將酶標記物與特異性抗體或抗原結合,形成酶標記抗體或抗原。酶標記物在反應中起到催化作用,加速反應進程,提高檢測靈敏度。
3. 酶促反應
在酶標記物與抗原抗體復合物結合后,加入底物溶液,底物在酶的催化下發生氧化還原反應,產生顏色變化。顏色深淺與待測樣本中的抗原或抗體濃度成正比。
4. 吸光度檢測
將反應體系中的吸光度進行測量,通過比較標準品溶液與待測樣本溶液的吸光度值,即可計算出待測樣本中的抗原或抗體濃度。
實驗所需自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
標準品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說明書進行稀釋 |
標準品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
檢測抗體-HRP | 6mL | 3mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說明書進行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
操作步驟
1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。
2)封閉:孔內加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素),阻止非特異性蛋白質結合。
3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標抗原或抗體的樣本。
4)洗滌:去除未結合的物質。
5)檢測抗體添加:加入對特定抗原有特異性的酶標記檢測抗體。
6) 再次洗滌:再次去除未結合的檢測抗體。
7)底物添加:加入酶的底物,酶作用于底物產生顏色變化。
8)終止反應:加入終止溶液停止酶的反應(在某些類型的ELISA中需要)。
9)讀數:使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下),吸光度與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。
兔甲狀腺過氧化物酶(TPO) ELISA 試劑盒
結果分析
根據標準品和樣本的OD值,繪制標準曲線,從而計算出樣本中角蛋白1(KRT1)的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關文獻。
注意事項
注意事項:
A 仔細閱讀說明書。
B 檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期,請勿使用。
C 按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)。
D 標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存。
E 準備好所有實驗額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標儀)。
F 按說明書將所用試劑平衡至室溫,根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
G 檢查試劑盒內每種試劑的貯存條件,所有試劑均按照試劑盒內說明書推薦的條件存儲。
H 檢查不穩定或者變質的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標準品稀釋液或者檢測稀釋液,可能在設計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標板之,必需不停攪拌。
I 充分的孵育時間和溫度。
J 切勿使用不同生產批號的試劑取代現有試劑或混合現有試劑。
K 在混合或溶解蛋白溶液時,避免泡沫產生。
L 在實驗開始之,安排好實驗流程。
M 在實驗開始之,清潔工作臺。
N 若有問題,應與我公司或代理商的技術支持聯系
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兔胰腺特異性轉錄因子1α (PTF1α) ELISA 試劑盒 |
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