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技術文章
如何解決色譜柱使用過程中出現的問題
一、保留值與分離度重現性不好原因分析
問題 | 原因 | 表現 |
不同色譜柱間差異使用期間柱變化 | 填料、鍵合相不同 柱床破壞 鍵合相丟失 硅膠基質溶解 強保留組分堆積堵塞 | 保留因子(k), 分離因子(a） 柱效(N） 保留因子(k), 分離因子(a） 柱效(N) 保留因子(k), 柱效(N) |
柱外效應 | 系統差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。 | 柱效(N) |
分離效果變差 | 流動相組分改變 流速改變 溫度改變 | 保留因子(k)，柱效變化很小 保留因子(k), 分離因子(a) 保留因子(k), 柱效變化很小 |
柱平衡慢 | 重新平衡時間不夠 | 保留因子(k), 柱效變化很小 |
柱超載 | 樣品量太大 | 保留因子(k), 柱效(N) |
二、造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應；
6．化學或二次保留（硅羥基）效應；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染。
三、如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學有關的拖尾問題
1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護柱。
C. 與HPLC系統有關的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大，（通�！�25μL）；
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*佳連接管應<20cm，內徑為0.007"）；
3.檢測器流通池的體積過大。
四、如何貯存色譜柱
1.防止緩沖溶液和水溶液流動相產生微生物,做到流動相用多少配多少, 或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細菌生長（一定當心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動相中加20%的有機改性劑，也可抑制微生物生長， 有機改性劑還有助于流動相脫氣。
2.盡可能將色譜柱貯存于100%有機溶劑（乙晴）中，避免在緩沖溶液中保存。
3.使用緩沖溶液后的色譜柱，應用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水-有機溶劑流動相沖洗色譜柱，后換成100%有機溶劑貯存。
4.避免用純水沖洗鍵合致密的C18柱。
5.將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。
原創作者：長沙科美分析儀器有限公司
