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              中海羊大腸桿菌培養基制備六大步驟解析

              點擊次數:292 發布時間:2021/12/16 9:31:13
               本文是中海生物技術zhzbio.com羊大腸桿菌培養基制備六大步驟解析:

              Ⅰ、凍存液的制備

              將含有足夠菌量的液體培養基進行離心后,沉淀過程中加入等量的40%甘油,置于-80°C冷凍。

              Ⅱ、培養基制備

              LB培養基配方:胰蛋白胨Trypton:10 克/升、酵母提取物YeastExtract:5 克/升、氯化鈉NaCl:10克/升、 pH7.4。

              液體培養基:胰蛋白胨10克、酵母粉5克、氯化鈉 10克、水1000毫升、 pH7.4。

              固體培養基:在液體培養基的基礎上加入1.5%~2.0%瓊脂

              Ⅲ、平板的制備

              ⒈稱取10.0 g胰蛋白胨、5.0g酵母粉、10.0g氯化鈉,加800mL二次水溶解,用玻璃棒攪拌均勻,用1mol/L NaOH調節pH至7.4左右,定容至1L,調節pH至7.4 如果溶液pH大于7.4,用1mol/LHCl調節。

              ⒉分裝到實驗錐形瓶中。1300-1930-979每瓶放入用量不宜過多,應在瓶底下方二厘米左右。如果需要固體培養基,分裝后在液體培養基中加入約2%瓊脂,即150毫升中 海液體培養基中加入2.5g瓊脂。

              ⒊用塑料薄膜蓋住錐形瓶口依次將濾紙透氣孔和硬紙,用橡皮筋扎好。用記號筆標明培養基名稱和制備日期,所有錐形瓶的操作如上所述。

              ⒋中海使用121°C高壓滅菌15分鐘。

              ⒌取出滅菌培養基放置置于60℃電鼓風干燥機中烘干,等錐形瓶封口紙干燥后取出。液體培養基可以直接儲存使用。因瓊脂培養基不會凝固。您可以通過紫外線消毒三十分鐘以上的無菌操作平臺上,把中'海培養基倒入在培養皿中約4mm厚度約10-15mL,直徑90mm,將培養皿堆疊在無菌操作臺上并放置約十分鐘。然后等瓊脂基本凝固后,就能涂抹到平板上了。

              ⒍如果平板不是即時使用,需把中海培養基滅菌后存放在錐形瓶中。當需要平板制備時,在微波爐中用中火檔位加熱約三分鐘易融化瓊脂,室溫環境冷卻二十分鐘確保不燙手再進行制備平板。

              Ⅳ、接種大腸桿菌

              ①取實驗室保存的大腸桿菌BL21凍存液,用酒精燈灼燒管口,打開離心管。

              ②接種方法1:用無菌移液器吸頭蘸取凍存液,在板邊緣畫條橫線,每三個車道為組,將盤子旋轉次,后在中間畫個鋸齒形;接種方法2:用吸管吸取100uL溶液放在平板上,用酒精燈消毒的厚涂片棒劃十字涂在平板上。

              ③因為實驗般需要挑取單個菌落,涂抹平板的操作需考慮冷凍液中細菌的數量。若菌量過多,應適當稀釋。通常方法更容易獲得單個菌落,涂抹平板應靠近酒精燈操作。如果平板上涂有冷凍保存液,應將其倒置以防止平板表面產生水蒸氣。

              Ⅴ、羊大腸桿菌的培養

              ①將接種板倒置,置于37℃恒溫培養箱中。約十小時后菌落生長。

              ②挑出生長狀態良好、特征明顯的單菌落,接種于新鮮滅菌的中.海LB液體培養基中,220轉/分+37℃恒溫振蕩培養9~12小時。菌落呈乳白色和圓形特征,菌落邊緣整齊,表面光滑,表面顏色與背面顏色樣。

              原創作者:中海生物技術(棗莊)有限公司

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