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waters高效液相色譜儀檢測人血漿中全反式維甲酸血藥含量
1實驗所用的儀器設備
Waters高效液相色譜儀（515型恒流泵，486型紫外檢測器，Millennium32色譜工作站）；xw__80A旋渦混合器；3K18高速冷凍離心機；高速離心機。
2 色譜條件
色譜柱為Supelcosil LC-18DB柱（5 Ixm，4．6 mm×250 mm）；柱溫為室溫。流動相 ：甲醇-水-冰乙酸（體積比82：17：1）；流速 1．5 mL·min 。檢測波長 340 nm。
3 血藥濃度測定法
3.1 ATRA對照溶液配制 精密稱取 ATRA對照品適量，以甲醇溶解并定容，制得濃度為 100 Ixg·mL的ATRA儲備液。將 ATRA儲備液以甲醇稀釋，配制濃度 分別 為 0．5、l、2．5、5、l0、25、50 g·mL 的ATRA對照溶液。
3.2 內標液配制 取內標阿維 A酸適量，置于 100mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得濃度為7．5 g·mL 的內標液。
3.3 樣本處理 精密吸取血漿樣品l mL，置 10 mL具塞離心試管中，加入內標溶液 20 L，旋渦混合 30 S。加入 1 mol·L 的HC1溶液500 IxL，漩渦混合 30 S，再加入乙酸乙酯 3 mL，旋渦混合 1 min，4 500 r／min離心5 min。轉移上層液至尖底試管中，于 37 qC水浴中氮氣流吹干。殘渣加入流動相200 IxL漩渦混合30 s使溶解，l0 000 r／min離心 5 min，取上清液 50 進樣，記錄色譜圖，以 ATRA峰面積（As）與內標峰面積（Ai）之比代入標準曲線計算 ATRA血藥濃度。
3.4 標準曲線 精密量取空白血漿 1 mL，置 10 mL具塞離心管中，分別加入不同濃度 ATRA對照溶液 20 L，混勻 ，使血藥濃度分別為 10、2O、50、100、200、500、 1000 ng·mL～。按樣本處理方法操作，以不 同濃度ATRA系列溶液的A 和 A 來計算A（A=A ／Ai），以A
值為縱坐標，ATRA質量濃度（P）為橫坐標進行直線回歸。
4 討 論
本文建立了一種靈敏、準確的ATRA血藥濃度高效液相色譜測定法，適用于 APL病人 ATRA血藥濃度的常規監測及臨床藥代動力學研究。通過監測 ATRA血藥濃度 ，可以更好地了解在某些 APL病人連續用藥治療中臨床復發及耐藥的原因。ATRA化學性質活潑，見光易異構化或氧化降解，因此在樣品提取過程中應特別注意避光操作。提取過程中血漿加入 1 mol·L HC1溶液，使血漿酸化，可提高萃取 回收率 ，乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率達到80％以上。
