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運用進樣液相色譜儀測定尿中肌酐和尿酸
1 實驗部分
1．I 儀器和試劑 高效液相色譜儀 ，51o型輸液泵及 U6K進樣器（Waters公 司，美國），SPD-1A型紫外檢測器 （日本島津），2O66型筆式記 錄儀（重慶儀表總廠） 色譜柱 ：150哪nx4 6哪n不銹鋼柱填充本室臺成的聚氧化 乙烯交聯 氨基丙基固定相（5 ）。尿酸（Slg~ 公司）和肌酐 （Merck公 司）均為生化試劑 ，實驗用水 為二次 蒸餾水 ，其它試 劑為分析純。流動相用耐酸玻璃砂漏斗（ ）過濾并脫氣 。
1．1 標準溶液的制備 肌酐和尿酸標準儲備渡（1 g／L）按文獻方法制備 ，可在冰箱中保存一個月。肌酐和屎酸標 準溶液及混臺標準溶液（1∞ r L）：取適量體積的相應標準儲備液 ，用水稀釋至所需濃度 ，使用前新鮮配制 。
1．2 分析條件 流動相 ：0．ol rad／L磷酸鹽緩沖溶液 10％甲醇，pH=4．81。流速 1 mIJmin。檢測波長 125 ran。靈敏度 0．16 Atrrs（輸出電壓 10 mY）。色譜分析溫度為室溫，以溶劑峰測定死時間。
1．4 定性殛定方法 采用外標法 ，以峰高定量。
2 結果與討論
2．1 檢潮波長的選擇 在 110 180-皿波長范圍測定肌酐和尿酸的紫外吸收，兩物質均在 125舢 有高吸收，故確定檢測波長 125 IlIn。
2．1 流動相的選擇 因分析 Ig標為尿中肌酐和尿酸 ，所以選擇流動相含 0．01 rad／L磷酸鹽緩沖液，使分析條件較溫和�？疾觳煌� pH的流動相對兩物質分離的影響 ，在 pH=4．81附近，肌酐和尿酸分 離度好。流動相中甲醇濃度對分離也有影響，選擇 10％的甲醇含量時，兩物質有好的分離度。在所選擇的分析條件下 ，無雜質峰干擾肌酐和尿酸的檢測。
2．2 工作 曲線、檢測限及線性范 圍 將不 同濃度的標準溶液分別進樣 ，進樣體積 10 ，以峰高對進樣量 （塢） 作線性回歸如下 ：肌酐 y：1．19+161．75z，相關系數 r= 1．0000；屎酸 Y=4．14+171．8 z，相關系數 r= 0．9999。用逐級稀釋法，在 0．01AUFS時 ，按信噪 比為 2倍計測得檢測限 ：肌酐，1 L-尿酸 ，2 Lo線性范圍： 肌酐 ，1～1×1 L；屎酸 ，2～1×1 ／Lo
2．4 回收辜及 精 密度 將 不 同量 的肌 酐 和屎 酸標 準溶 液加 人稀 釋 的尿樣 作色譜 分 析 ，回收率 ：肌酐， 101．0％ ．RSD=2．00go（n=8）；尿酸，96．17％ ，RSD=1．97％（n：8）。
2．5 樣 品測定 取正常人新鮮屎樣用水稀釋 10倍 ，進樣 1 ，對 8份尿樣進行分析，每份平行測定 2～5次， R蚰 <6％。樣品攫I定結果：肌酐，0．78—1．77 g／L；尿酸 0．18—0 62 k 樣品測定結果與文獻報道的正常范圍相符，譜分析時問不超過 6 ndn。
