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毛細管電色譜在要騙你分析中的使用
毛細管電色譜是近10年來綜合了現代*新分離技術高效液相色譜和毛細管電泳的優勢而發展起來的高效電分離微柱液相色譜技術。CEC一般采用熔融石英毛細管,在柱內填充或在柱壁鍵合固定相,用高壓直流電源(或加一定的壓力)代替高壓泵,即用電滲流驅動流動相,溶質依據它們在流動相與固定相中的分配系數的不同和自身電泳淌度的差異得到分離,既能分離中性物質又能分析帶電組分。因此,可將它定義為“一種溶質與固定相間的相互作用占主導地位的電泳過程”。CEC是HPLC和CE的有機結合,不僅具有CE水平的高柱效,同時還具有HPLC的選擇性。它克服了CE選擇性差和分離中性物質的困難,同時大大提高了液相色譜的分離效率,開辟了高效微分離技術的新途徑。近年來,隨著CEC柱制備技術、分離機制、儀器設備的不斷研究和發展,CEC已在分析領域中引起廣泛關注,并在有機小分子分離、環境分析、藥物分析和生化分析等方面得到應用。本文就CEC的基本原理、研究進展及其在藥物分析中的應用作一概述。
目前CEC主要用于包括多環芳烴在內的芳香族化合物、染料、蛋白、肽、寡聚核苷酸、氨基酸、對映體等,在藥物分析中的應用逐漸增加。對于疏水性強的樣品或電泳淌度相近的離子化合物、對映體,CEC體現出強大的分離能力,并在分析速度、重現性、檢測限、定量方面達到了應用的要求。
5.1手性分離CEC進行手性藥物對映體拆分主要有3種方式:(1)非手性固定相結合手性添加劑流動相,手性選擇作用依靠流動相中添加的手性選擇劑產生。(2)手性固定相,固定相上鍵合手性選擇劑,如環糊精、蛋白等。(3)手性分子烙印固定相。進行記憶性、專一性手性分離。Mayer等在50μm開管柱內壁涂布鍵合了γ-CD或β-CD的二甲基聚硅氧烷,在中性條件下,較好地分離了NSAIDs(布洛芬、氟聯苯丙酸、芴丙酸、乙哚乙酸)和1-苯乙醇的對映體。用填充法分別制備3μmODS普通電色譜柱和5μm鍵合HP-β-CD的硅膠顆粒手性電色譜柱,進行了手性固定相和非手性固定相手性分離的比較,在拆分氯噻酮時,手性固定相方式顯示出分離時間短、高選擇性和高分辨率的優勢。另外,Li等用β-CD手性固定相拆分了環己巴比妥、安息香、脫氧核糖蛋白(DNP)-蛋氨酸、DNP-乙硫氨酸和DNP-正亮氨酸的對映體。用鍵合α1-酸性糖蛋白的手性固定相電色譜柱分離了環己巴比妥、安息香、戊巴比妥、異環磷酰胺、環磷酰胺、雙異丙吡胺、美多心安、心得安、心得平和心得舒,并考察了pH、電解質濃度、有機溶劑濃度對保留和手性選擇性的影響。在固定相上鍵合了人血清白蛋白,拆分了安息香、羥基安定。*近,分子烙印技術已開始引用于手性分離,Schweitz等在毛細管柱內填充含有功能性單體、交聯劑、烙印分子(如R-心得安、S-美多心安)的聚合物,使其具有單一的記憶特性,可用于相應手性藥物的快速分離,如在120s內可使心得安、美多心安對映體達到基線分離。
5.2復雜成分分析復雜成分分析,特別是分子結構相近或電泳淌度接近的混合成分的分離是比較困難,也是非常重要的。近年來CEC在這方面展示了良好的應用前景,利用梯度洗脫電色譜較好地分析了生物體液中皮質醇類化合物,在加電壓的同時施加1.2MPa氣壓,實施加壓電色譜并梯度洗脫,生物體液中腎上腺甾酮、氫化可的松、地塞米松、氟考龍等能在較短時間內很好地分離,當樣品預處理后,連續進樣200次都能獲得良好的分析結果。同樣地,利用梯度洗脫電色譜結合電噴霧離子質譜檢測,分離了苯二氮類(安定、硝基安定)、皮質醇類(去炎松、氫化可的松、潑尼松、可的松、甲強龍、倍他米松、地塞米松、腎上腺甾酮、氟考龍、丙米松)和噻嗪類利尿劑(甲苯喹唑酮、氟硫噻嗪、雙氫氟噻嗪、芐氟噻嗪、甲氯噻嗪)等藥物。
先用ODS反相電色譜柱分析了甾類化合物Fluticasonepropionate及其含有的雜質,在提高流動相pH和有機溶劑乙腈濃度后,分析時間明顯縮短,并在相近的條件下分析了前列腺素以及合成的中間體和其它雜質,還較好地分離了頭孢氨呋肟的非對映異構體。為了更好地分離強極性或帶電組分,達到快速高效,用強陽離子交換樹脂替代ODS填料,對三環類抗抑郁劑(丙咪嗪、阿米替林、去甲丙咪嗪、去甲替林、甲吡咯嗪、氯丙嗪、芐氟噻嗪)進行分析,獲得8×106.m-1理論塔板數,并有效地改善了峰形。采用加壓電色譜,15min內分離了抗癲癇藥物及其代謝物(ethosuccinimid、撲癇酮、環氧卡馬西平、10,11-二羥卡馬西平、苯妥英、卡馬西平),10min內分離了β-受體激動劑(特布他林、酚丙喘寧、克喘素),還考察了電壓、附加壓力大小對分離效率和保留時間的影響。作者認為,在加壓下可以降低流動相pH,不需要過多考慮電滲流的損失。全面考察了電色譜系統的電壓、溫控、樣品進樣量、有機溶劑等因素對藥物分析的影響,較好地分離了tipredane的非對映異構體,并有很好的重現性,可以達到定量分析的要求。
*近,采用梯度電色譜柱結合電噴霧離子質譜檢測,分析了異羥洋地黃毒苷元、羥基洋地黃毒苷元、華蟾蜍它靈、洋地黃毒苷元、華蟾蜍精、蟾蜍靈等甾類化合物。魏偉等[27]用離子交換電色譜分離鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿等生物堿類成分,嘗試用CEC分離中藥復雜成分人參皂苷,開始了CEC在中藥復雜成分分析中的應用研究。
轉載自:www.shunstar.cn
原創作者:杭州瑞析科技有限公司