大鼠骨鈣素（bgp）elisa試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱：通用名：大鼠骨鈣素（bgp）酶聯免疫分析試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中骨鈣素（bgp）的含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 大鼠骨鈣素（bgp）水平。用純化的大鼠骨鈣素（bgp）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入骨鈣素（bgp），再與hrp標記的骨鈣素（bgp）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨鈣素（bgp）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素（bgp）的含量。試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（1.35μg/l） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑a液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張; 6 顯色劑b液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 標本處理及要求1．血清、血漿標本可直接測定；2．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。3．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。操作步驟1.;;;;;;;; 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃 度分別為 9μg/l ，6μg/l ，3μg/l，1.5μg/l，0.75μg/l）。2.;;;;;;;; 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。3.;;;;;;;; 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。;; 4.;;;;;;;; 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.;;;;;;;; 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.;;;;;;;; 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.;;;;;;;; 溫育：操作同3。8.;;;;;;;; 洗滌：操作同5。9.;;;;;;;; 顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.;;;; 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11.;;;; 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。;計算;;以標準物的濃度為橫坐標，od值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的od值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。注意事項1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4．;請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本od值大于標準品孔孔od值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。5．;嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.6．本試劑不同批號組分不得混用。7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．底物請避光保存。檢測范圍：0.5μg/l -10μg/l規格：96人份/盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月

原創作者：杭州旺森科技有限公司