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              技術文章

              常用培養基和抗生素的配制方法

              點擊次數:960 發布時間:2011/3/24 11:04:03

                                  細菌培養常用培養基和抗生素的配制方法

              www.runwelltac.com

              一、常用培養

              1、LB培養基
              將下列組分溶解在0.9L水中:
              蛋白胨10g
              酵母提取物5g
              氯化鈉10g

              如果需要用1NNaOH(~1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

              2、SOB培養基
              將下列組分溶解在0.9L水中:
              蛋白胨20g
              酵母提取物5g
              氯化鈉0.5g
              1mol/L氯化鉀2.5ml

              用水補足體積到1L。分成100ml的小份,高壓滅菌。培養基冷卻到室溫后,再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。

              3、SOC培養基
              成分、方法同SOB培養基的配制,只是在培養基冷卻到室溫后,除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外,再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中,再用水補足到100ml,用0.22um的濾膜過濾除菌)。

              4、TB培養基
              將下列組分溶解在0.9L水中:
              蛋白胨12g
              酵母提取物24g
              甘油4ml

              各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃,再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。

              5、2×YT培養基
              將下列組分溶解在0.9L水中:
              蛋白胨16g
              酵母提取物10g
              氯化鈉4ml

              如果需要用1NNaOH(~1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

              6、YPD培養基
              將下列組分溶解在0.9L水中:
              蛋白胨20g
              酵母提取物10g
              葡萄糖20g

              用水補足體積為1L后,高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前,對色氨酸營養缺陷型每升培養基添加1.6g色氨酸,因為YPD培養基是色氨酸限制型培養基。為了配制平板,需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。

              二、常用抗生素

              氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
              溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
              溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
              溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養基。

              卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
              溶解0.1g卡那霉素于足量的水中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
              溶解0.25g氯霉素足量的無水乙醇中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)
              溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)
              溶解0.05g萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              四環素(tetracyyline)(10mg/ml)
              溶解0.1g四環素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無堿的四環素溶于無水乙醇,定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

              技巧:如配制10mg/ml卡那霉素,先在鹽水瓶或血清瓶加入10ml雙蒸水,高壓,冷卻后加入0.1g卡那霉素,混勻,濾膜過濾到試管中,再以1ml/管分裝到EP管中待用。

              原創作者:杭州旺森科技有限公司

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