HDVAb(IgM) ELISA試劑盒操做方法
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HDVAb(IgM) ELISA試劑盒操做方法樣本處理及要求：

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

注意事項：

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

     

     HDVAb(IgM) ELISA試劑盒操做方法

    試劑準備：

    試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

    20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

     

    操作步驟：

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

     每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值

HDVAb(IgM) ELISA試劑盒操做方法說明：

由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。

1. 終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

2. 不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。

3. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結果。

4. 本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

5. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。

6. 若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

   某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
   有效期：6個月
   用途：本產品僅供科學研究
   規格：48T/96T（可提供免費代測服務）
   1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
   2．靈敏度：檢測濃度小于10 pg/ml。
   3．特：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
   4．重復性：板內、板間變異系數均小于15%。問題回答

   HDVAb(IgM) ELISA試劑盒操做方法組成:

   1、酶聯板（assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
   2、標準品（standard）：2瓶（凍干品）。
   3、樣品稀釋液（sample diluent）：1×20ml/瓶。
   4、生物素標記抗體稀釋液（biotin-antibody diluent）：1×10ml/瓶。
   5、辣根化物酶標記親和素稀釋液 （hrp-idin diluent）：1×10ml/瓶。
   6、生物素標記抗體（biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
   7、辣根化物酶標記親和素（hrp-idin）：1×120μl/瓶（1：100）
   8、底物溶液（tmb substrate）：1×10ml/瓶。
   9、濃洗滌液（wash buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
   10、終止液（s solution）：1×10ml/瓶（2n h2so4）。問：新鮮采集后直接零下20度凍存的可以唄，放在95%的酒精里保存的樣品可以嗎？
   答:可以的
   問：我們算出來的ACH含量為什么出現負值?
   答：說明個別樣本的濃度很低，當濃度接近第6個點的時候 直線方程就有可能計算出負值
   問：一個孔需要多少量的血清?
   答：一個孔上樣量微升。
   問：那標準品出現跳孔是怎么回事?
   答：你完全可以拿同樣的標準品再重新做一次 ，做之搖勻一下，肯定可以做好 。那是操作問題了 ，你可以再做一次的，之也有客戶出現過類似的問題 學生做了2次都沒做好 后來老師自己做 就是搖勻了一下，其他操作都一樣 標準曲線做的很。1.標準品的稀釋與加樣
   2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
   3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
   4.配液：將30（48t的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48t的20倍）倍稀釋后備用。
   5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復5次，拍干。
   6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
   7.溫育：操作同3。
   8.洗滌：操作同5。
   9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
   10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
   11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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