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BL21(DE3)pLysS感受態細胞詳細說明
點擊次數：92發布時間：2017/12/5 13:27:21
更新日期：2020/1/10 12:05:03
所 在 地：中國大陸
產品型號：
優質供應
詳細內容
中文名： BL21(DE3)pLysS感受態細胞
供應商：上海遠慕
規格：10×100ul
分類：感受態制備
保存：—20℃,12個月
用途：基因克隆表達
說明：BL21(DE3)pLysS受體菌含有表達T7溶菌酶的基因,適合毒性蛋白和非毒性蛋白的表達
BL21(DE3)pLysS感受態細胞詳細說明：
BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達，適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)。BL21(DE3)pLysS 感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率高達108 cfu/µg DNA。
BL21(DE3)pLysS感受態細胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入 目的DNA（質�；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm 復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所選質粒篩選抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
6.根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
7.待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
公司介紹：
遠慕生物現貨供應進口/國產ELISA試劑盒，標準品對照品，動物血清血漿，質粒載體，質粒提取試劑盒，金標檢測試劑盒，培養基，抗體，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 維生素，有機試劑，無機試劑，環保試劑，化學試劑，生化試劑，實驗耗材，液體試劑，細胞培養，其他科研試劑等，提供ELISA試劑盒免費代測服務，品種齊全，了解更多試劑詳情請來電洽談！
6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素，以防質粒丟失。
BL21(DE3)pLysS感受態細胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入 目的DNA（質�；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm 復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所選質粒篩選抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
6.根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
7.待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
公司介紹：
遠慕生物現貨供應進口/國產ELISA試劑盒，標準品對照品，動物血清血漿，質粒載體，質粒提取試劑盒，金標檢測試劑盒，培養基，抗體，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 維生素，有機試劑，無機試劑，環保試劑，化學試劑，生化試劑，實驗耗材，液體試劑，細胞培養，其他科研試劑等，提供ELISA試劑盒免費代測服務，品種齊全，了解更多試劑詳情請來電洽談！
BL21(DE3)pLysS感受態細胞注意事項：
1. 感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質�？上鄳獪p少*終用于涂板的菌量。
4. 誘導時，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白，*佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
1. 感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質�？上鄳獪p少*終用于涂板的菌量。
4. 誘導時，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白，*佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素，以防質粒丟失。
BL21(DE3)pLysS感受態細胞相關產呂如下：
DH5α受體菌
DH5α受體菌
DH5α感受態細胞
BL21(DE3)感受態細胞
瓊脂結冷膠混合物｜植物凝膠
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BL21(DE3)受體菌
BL21(DE3)pLysS受體菌
BL21(DE3)pLysS感受態細胞
HB101受體菌
HB101受體菌
HB101感受態細胞
JM109感受態細胞
JM109受體菌
Top10感受態細胞
細胞松弛素B儲存液（Cytochalasin B,1mg/ml）
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Top10受體菌
Rossita感受態細胞
轉化儲存液(2×TSS,pH6.5)
磷酸緩沖鹽溶液（10×PBS,無鈣鎂）
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