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磷酸鈣法細胞轉染試劑盒保存條件
點擊次數：32發布時間：2017/12/4 15:50:03
更新日期：2019/11/22 17:19:13
所 在 地：中國大陸
產品型號：
相關標簽：磷酸鈣法細胞轉染試劑盒
優質供應
詳細內容
中文名： 磷酸鈣法細胞轉染試劑盒
供應商：上海遠慕
規格：200T
分類：細胞其他
保存溫度：—20℃
有效期：12個月
用途：用于磷酸鈣法轉染細胞,適合于大多數貼壁細胞的轉染。
說明：HEK293是*適合磷酸鈣法轉染的細胞,優化條件后轉染效率可以高達85%以上,一般的轉染效率可達40～50%左右。注意無菌操作。
遠慕生物是家代理生產與銷售科研試劑為一體的老牌商家，為客戶提供優質的不同系列試劑，包含有：ELISA試劑盒，液體試劑，動物血清血漿，細胞培養，生物試劑，生化試劑，化學試劑，培養基，蛋白質，實驗耗材，進口試劑，標準品對照品，抗體，染色液，緩沖液，溶液，其他實驗試劑等，如有需要，歡迎訂購！
磷酸鈣法細胞轉染試劑盒操作流程：
貼壁細胞轉染：
1、 在轉染前24h用胰蛋白酶消化培養細胞，取適量對數期細胞轉移至新的培養器皿中， 待細胞密度大70～80%滿時即可進行轉染。后續操作步驟均按6孔板計算，如果轉染器皿不同，請按比例自行調節用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培養液，置于37℃ 5% CO2培 養箱培養。
3、 取DNA(體積不宜超過20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混勻，即為 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在1～2min)。
5、 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時可能出現極其微小顆粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質均勻加入到6孔板細胞中，輕輕晃動混勻。
7、 置于37℃ 5% CO2培養箱培養。
8、 去除培養液，用PBS清洗細胞2次，加入2ml完全培養液繼續培養，一般24h后可見 轉染細胞的表達。
懸浮細胞轉染：
1、 低速離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌1次。
2、 取DNA(體積不宜超過20μl)加Calcium chloride solution，混勻，即為DNA-CaCl2 溶液。
貼壁細胞轉染：
1、 在轉染前24h用胰蛋白酶消化培養細胞，取適量對數期細胞轉移至新的培養器皿中， 待細胞密度大70～80%滿時即可進行轉染。后續操作步驟均按6孔板計算，如果轉染器皿不同，請按比例自行調節用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培養液，置于37℃ 5% CO2培 養箱培養。
3、 取DNA(體積不宜超過20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混勻，即為 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在1～2min)。
5、 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時可能出現極其微小顆粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質均勻加入到6孔板細胞中，輕輕晃動混勻。
7、 置于37℃ 5% CO2培養箱培養。
8、 去除培養液，用PBS清洗細胞2次，加入2ml完全培養液繼續培養，一般24h后可見 轉染細胞的表達。
懸浮細胞轉染：
1、 低速離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌1次。
2、 取DNA(體積不宜超過20μl)加Calcium chloride solution，混勻，即為DNA-CaCl2 溶液。
3、 取BBS solution，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液。
4、 室溫靜置，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時可能出現極其微小顆粒沉淀。
5、 每106個細胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培養基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質均勻 加入到6孔板中，輕輕晃動混勻。 7、 置于37℃ 5% CO2培養箱培養，去除培養液，用PBS清洗細胞2次，加入2ml完全 培養液繼續培養，一般24h后可見轉染細胞的表達。
磷酸鈣法細胞轉染試劑盒注意事項：
4、 室溫靜置，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時可能出現極其微小顆粒沉淀。
5、 每106個細胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培養基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質均勻 加入到6孔板中，輕輕晃動混勻。 7、 置于37℃ 5% CO2培養箱培養，去除培養液，用PBS清洗細胞2次，加入2ml完全 培養液繼續培養，一般24h后可見轉染細胞的表達。
磷酸鈣法細胞轉染試劑盒注意事項：
1.轉染時，把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中。
2.高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測抽提到的質粒90%以上都是超螺旋。
3.在用磷酸鈣法轉染細胞時應使用濃度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的*佳濃度為3%左右。
4.BBS溶液的pH值直接關系到轉染效率，盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。
5. 轉染時由于質粒不同、細胞不同，*佳的質粒用量需自行摸索。
