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關于細胞轉染，你知道多少
細胞轉染定義：將外源分子如DNA RNA等導入真核細胞的技術。
瞬時轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72h內分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。
穩定轉染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩定轉染的同源細胞系。
方法及特點:
化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法
物理法：電穿孔法、顯微注射法、biolistic顆粒傳遞法
病毒介導法：逆轉錄病毒、腺病毒
陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。過程如下圖：
特點：簡單通用，適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大。
脂質體法由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。
電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進入的微孔。
特點：需要特定儀器，適用性廣，除了質粒外，還可轉染大的基因組，細胞致死率高。
逆轉錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進入宿主細胞，之后反轉錄酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中。
特點：穩定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大。
腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表面的受體結合，繼而在αV整合素介導下被細胞內吞。
特點：可用于難轉染的細胞。
轉染步驟：DAY-1 鋪板
DAY 0 DNA分子與復合物混合，轉染細胞
After 監測轉染水平
影響轉染的因素：
1、血清 血清影響復合物的形成，降低轉染效率
陽離子脂質體和DNA的zui佳量在使用血清時會有所不同，因此想在轉染培養基中加入血清時要進行條件優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康，對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用OPTI-MEM I培養基。對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用LIPOFECTAMINE 2000。
2、抗生素 比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。
3、細胞代數 轉染前細胞zui好經過1-2次傳代保證細胞生長旺盛容易轉染，注意貼壁細胞一旦長滿就不好轉染。
4、細胞鋪板密度 一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2*10^6－－4*10^6細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。
5、DNA質量 DNA質量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會顯著影響轉染復合物的有效形成和轉染的進行。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
