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質粒載體選擇主要考慮哪些因素嗎?
把一個有用的基因（目的基因——研究或應用基因）通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體（vector）。
P.S. 基因工程所用的 vector 實際上是 DNA 分子，是用來攜帶目的基因片段進入受體細胞的 DNA。
選擇載體主要依據構建的目的，同時要考慮載體中應有合適的限制酶切位點。如果構建的目的是要表達一個特定的基因，則要選擇合適的表達載體。
載體選擇主要考慮下述 3 點：
1. 構建 DNA 重組體的目的，克隆擴增/表達表達，選擇合適的克隆載體/表達載體。
2. 載體的類型：
克隆載體的克隆能力－據克隆片段大�。ù筮x大，小選�。�。如<10kb 選質粒。
表達載體據受體細胞類型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳類細胞表達載體。
對原核表達載體應該注意 3 點：選擇合適的啟動子及相應的受體菌；用于表達真核蛋白質時注意克服 4 個困難和閱讀框錯位；表達天然蛋白質或融合蛋白作為相應載體的參考。
3. 載體 MCS 中的酶切位點數與組成方向因載體不同而異，適應目的基因與載體易于鏈接，不產生閱讀框架錯位。
選用質粒（常用）做載體的 4 點要求：
選分子量小的質粒，即小載體（1－1.5 kb）→不易損壞，在細菌里面拷貝數也多（也有大載體）；
一般使用松弛型質粒在細菌里擴增不受約束，一般 10 個以上的拷貝，而嚴謹型質粒 < 10 個。
必需具備一個以上的酶切位點，有選擇的余地；
必需有易檢測的標記，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（試一試）。
無論選用哪種載體，首先都要獲得載體分子，然后采用適當的限制酶將載體 DNA 進行切割，獲得分子，以便于與目的基因片段進行連接。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
