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遠慕簡介:質粒,那些你不知道的小知識?
質粒組成要素
一個合格的質粒含有以下組成部分：
復制起始位點 Ori 即控制復制起始的位點。原核生物 DNA 分子中只有一個復制起始點。而真核生物 DNA 分子有多個復制起始位點�？股乜剐曰� 可以便于加以檢測，如 Amp+ 、Kan+。多克隆位點 MCS 克隆攜帶外源基因片段P/E, 啟動子/增強子Terms 終止信號加 poly（A）信號, 可以起到穩定 mRNA 作用.
如何閱讀質粒圖譜
步：首先看 Ori 的位置，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒）。
第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。
Ampr 水解β－內酰胺環，解除氨芐的毒性。
tetr 可以阻止四環素進入細胞。
camr 生成氯霉素羥乙�；苌�，使之失去毒性。
neor（kanr）氨基糖苷磷酸轉移酶 使 G418（長那霉素衍生物）失活
hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。質粒一般只能容納小于 10Kb 的外源 DNA 片段。一般來說，外源 DNA 片段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。
第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號。這是用來區別克隆載體與表達載體�？寺≥d體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩。
啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號
啟動子－促進 DNA 轉錄的 DNA 順序，這個 DNA 區域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結合并使之開始轉錄的部位，但啟動子本身不被轉錄。
增強子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強鄰近基因轉錄過程的調控順序。其作用與增強子所在的位置或方向無關。即在所調控基因上游或下游均可發揮作用。/沉默子－負增強子，負調控序列。
核糖體結合位點/起始密碼/SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個結合位點，對于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。
轉錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結構基因的*后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區，這 2 部分共同構成 poly（A）加尾信號。結構基因的*后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區，這 2 部分共同構成 poly（A）加尾信號。
為什么質粒圖譜上有的箭頭順時針有的箭頭逆時針，那其實是代表兩條 DNA 鏈，即質粒是環狀雙鏈 DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
